喹赛多药理与毒理活性成分筛选研究

发布时间：2024-01-19 17:52

　　喹赛多作为一种新型的饲料添加剂具有良好的促生长作用,与喹噁啉类其它药物相比,喹赛多毒性作用很低。喹赛多在体内可被代谢成多种化合物,其中主要代谢物有cy1、cy4、cy6、cy12。迄今为止,仍然不明确喹赛多与代谢物的活性大小。所以有必要对喹赛多及其代谢物的活性大小进行比较,进而筛选出活性化合物,这对理解喹赛多的药理与毒理作用机理具有重要的意义。 药物活性化合物筛选指标的选择成为实验的关键,通过文献调研并结合本实验室对喹赛多的实际研究进展情况,最终确定以EGF mRNA的表达作为喹赛多药理活性成分筛选的指标；以化合物与细胞孵育后对细胞活力的影响作为喹赛多毒理活性成分的指标。 1喹赛多的药理活性成分筛选 采用RT-qPCR技术,首先测定不同浓度的喹赛多与细胞孵育不同时间后EGF的表达,以筛选出喹赛多与细胞作用后EGF mRNA上调表达的最佳浓度与时间点。结果显示,2μM喹赛多与细胞孵育1h后EGF mRNA的表达量与空白组相比上调2倍。喹赛多代谢物与细胞孵育后EGF mRNA上调倍数不如喹赛多显著,在所有代谢物中cy12对EGF的上调作用最明显,达到了1.3倍,cy6其次,cyl最低。所以...

【文章页数】：100 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
缩略词表
1 前言
    1.1 研究背景
        1.1.1 喹赛多药理与毒理作用机制研究进展
        1.1.2 细胞模型用于药物筛选的研究进展
    1.2 研究内容
    1.3 研究思路
    1.4 研究意义
2 材料和方法
    2.1 细胞株
    2.2 药品和试剂
    2.3 主要仪器和设备
    2.4 溶液配制
    2.5 细胞的复苏、传代和冻存
    2.6 总RNA的提取
    2.7 总RNA纯度及完整性的检测
    2.8 反转录反应
    2.9 实时荧光定量PCR检测目的基因mRNA表达水平
    2.10 Western Blot实验
        2.10.1 细胞蛋白提取及蛋白浓度测定
        2.10.2 SDS-PAGE电泳
        2.10.3 Western blot
    2.11 细胞活力的检测
        2.11.1 MTT法检测喹嗯啉类代谢物对L02细胞的活力影响
        2.11.2 乳酸脱氢酶(LDH)释放测定
        2.11.3 细胞内自由基(ROS)释放测定
        2.11.4 细胞凋亡的检测
    2.12 统计学分析
3 结果
    3.1 总RNA质量
    3.2 喹赛多及其代谢物对EGF基因表达的时效量效关系
        3.2.1 喹赛多对EGF基因表达的时效量效关系分析
        3.2.2 喹赛多的主要代谢物对EGF mRNA表达的影响
        3.2.3 PI3K-Akt通路对EGF表达的调控
    3.3 2μM喹赛多与细胞孵育后对ROS释放的影响
    3.4 2gM喹赛多对FOXO1和P53 mRNA和蛋白表达的影响
    3.5 2gM喹赛多对cyclin D1表达的影响
    3.6 喹赛多及其代谢物对L02细胞剂量及时间依赖性毒性作用
    3.7 喹嗯啉类代谢物对L02细胞中LDH释放的影响
    3.8 喹赛多及其代谢物对ROS释放的影响
    3.9 100μM喹赛多对FOXO1和P53表达的影响
    3.10 喹赛多与EGF和FOXO1及p53表达的量效关系
    3.11 100MM喹赛多对细胞凋亡的影响
4 讨论
    4.1 喹赛多及其代谢物药理与毒理活性大小
    4.2 喹赛多促进ROS释放的时效量效及与Akt激活间的关系
    4.3 P53表达的量效关系以及p53表达和Akt激活间的关系
    4.4 FOXO1的量效关系以及FOXO1与Akt激活之间的关系
    4.5 喹赛多的药理与毒理作用机理
5 全文总结
6 文献综述
参考文献
致谢
附录
    附录Ⅰ---研究生简介
    附录Ⅱ--实时荧光PCR各基因扩增产物的溶解曲线分析结果
    附录Ⅲ-实验过程中细胞培养的步骤
    附录Ⅳ-实验过程中RNA的提取步骤
    附录Ⅴ-BCA标曲的测定
    对各答辩委员的答复书



本文编号：3880219