植物乳杆菌对绵羊瘤胃上皮细胞内SBD-1基因表达的影响

发布时间：2024-01-20 16:20

　　防御素(defensins)是动物体内先天性免疫系统的主要成员之一,具有广谱的抗微生物活性,广泛表达在动物组织细胞中,它的表达受到多种因素的影响,其中益生菌是影响因素之一。本试验选用益生植物乳杆菌研究对体外培养的绵羊瘤胃上皮细胞内防御素表达的影响。首先建立稳定的绵羊瘤胃上皮细胞培养体系,在无菌条件下获取传一代绵羊瘤胃上皮细胞,并通过形态学、绘制生长曲线和免疫组化方法对其进行鉴定,然后将活化并纯化好的植物乳杆菌和体外培养的传一代绵羊瘤胃上皮细胞进行共培养,通过不同的菌液浓度和不同的刺激时间,利用荧光定量PCR技术研究接受刺激后瘤胃上皮细胞中绵羊β-防御素-1(Sheep Beta-Defensin-1,SBD-1)基因表达水平的差异。结果表明：通过鉴定,证实所培养的细胞具有典型的上皮细胞特征,并且生长状态良好,适合作为下一步研究的试验模型。通过植物乳杆菌和瘤胃上皮细胞共培养后发现,当菌液浓度为109cfu/ml刺激上皮细胞8h后,SBD-1的表达量达到最高水平,当菌液浓度为108、107和106cfu/ml时的表达量与空白对照基本持平。通过比较当菌液浓度为1010和109cfu/ml刺激...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
1 引言
    1.1 防御素的研究进展
        1.1.1 防御素的发现
        1.1.2 防御素的分类及分布
        1.1.3 β-防御素的结构和表达调控
        1.1.4 β-防御素的作用
    1.2 绵羊瘤胃上皮结构及上皮细胞培养
        1.2.1 绵羊瘤胃上皮结构
        1.2.2 瘤胃上皮细胞培养
    1.3 益生菌
        1.3.1 益生菌的定义
        1.3.2 益生菌的分布及分类
        1.3.3 益生菌的生理功能
        1.3.4 植物乳杆菌的生物学特性和生理功能
    1.4 试验的目的和意义
2 试验部分
    2.1 材料与方法
        2.1.1 试验材料
        2.1.2 仪器设备
        2.1.3 试验药品
    2.2 试验方法
        2.2.1 绵羊瘤胃上皮细胞培养及鉴定
        2.2.2 绵羊瘤胃上皮细胞的特征鉴定
        2.2.3 植物乳杆菌的培养
        2.2.4 植物乳杆菌对绵羊上皮细胞β-防御素(SBD-1)基因表达的影
3 试验结果
    3.1 绵羊瘤胃上皮细胞培养
        3.1.1 绵羊瘤胃上皮细胞原代培养
        3.1.2 绵羊瘤胃上皮细胞传代培养
        3.1.3 绵羊瘤胃上皮细胞的冻存与复苏
    3.2 绵羊上皮细胞的特征鉴定
        3.2.1 光学显微镜检查
        3.2.2 瘤胃上皮传代细胞的生长曲线
        3.2.3 免疫组化检测
    3.3 植物乳杆菌的培养
    3.4 植物乳杆菌对绵羊上皮细胞β-防御素(SBD-1)基因表达的影响
        3.4.1 瘤胃上皮细胞总RNA的检测结果
        3.4.2 荧光定量PCR检测瘤胃上皮细胞SBD-1和β-actin基因mRNA的表达
4 讨论
    4.1 绵羊瘤胃上皮细胞的培养
        4.1.1 绵羊瘤胃上皮细胞的原代及传代培养
        4.1.2 绵羊瘤胃上皮细胞的鉴定
    4.2 植物乳杆菌的培养
    4.3 植物乳杆菌对SBD-1基因表达的影响
5 结论
致谢
参考文献
作者简介



本文编号：3881165