TSSK6与IZUMO1和IZUMO4在绵羊精子上的共定位

发布时间：2024-01-24 19:08

　　哺乳动物精卵融合是精子和卵子上多种蛋白相互作用介导完成的。但这些蛋白在精卵融合过程中的具体作用还不清楚。经基因敲除小鼠模型鉴定,精子上的IZUMO家族成员IZUMO1和睾丸特异性丝氨酸苏氨酸激酶TSSK6是精卵融合所必需的蛋白。IZUMO家族有四个成员,其中IZUMO1、IZUMO2和IZUMO3是睾丸特异性表达的膜蛋白,而IZUMO4是睾丸和其它组织均表达的可溶性蛋白。本实验室前期用酵母双杂交、哺乳动物双杂交和免疫共沉淀技术在分子水平上鉴定发现绵羊TSSK6既能与IZUMO1结合也能与IZUMO4结合,但这三种蛋白在绵羊精子细胞上是否结合?什么时候、什么部位结合?还需要进一步鉴定。本实验拟用间接免疫荧光技术研究TSSK6与IZUMO1和IZUMO4在绵羊精子上的共定位,从而进一步确定这三种蛋白在细胞水平是否结合。本实验首先克隆了绵羊Tssk6、Izumo1和Izumo4的cDNA编码区,分别插入到pGEX-4T-1质粒构建了pGEX-Tssk6、pGEX-Izumo1和pGEX-Izumo4原核表达载体,分别在大肠杆菌中表达了GST-TSSK6、GST-IZUMO1和GST-IZUM...

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

图2.1鉴定羊TSSK6与IZUMO1和IZUMO4在精子上共定位的技术路线

图2.5pGEX-Tssk6重组载体的构建过程

图2.8绵羊Izumo1、Izumo4cDNAPCR琼脂糖凝胶电泳结果

图2.10绵羊pMD-Izumo1、pMD-Izumo4重组载体双酶切琼脂糖凝胶电泳结果

本文编号：3884303