牛CD300a基因荧光定量PCR检测方法的建立及其真核表达载体的构建

发布时间：2024-01-27 15:45

　　CD300a分子是CD300分子超家族中的一个重要成员,是白细胞的表面抗原之一,在调节不同的免疫细胞过程中起着重要的作用。CD300a广泛表达于髓系细胞及淋巴系细胞,且表达的差异性取决于细胞的类型,并参与调节细胞的生长过程,同时与过敏性疾病、感染性疾病、慢性炎症等疾病关系紧密。本研究根据GenBank中的牛源CD300a基因序列设计一对特异性引物,应用牛单核巨噬细胞cDNA作为模版,扩增CD300a基因片段,建立检测该基因的SYBR Green I荧光定量PCR方法,并做出荧光定量PCR的标准曲线。再设计另外一对带有酶切位点引物,扩增CD300a全基因,构建CD300a全基因的真核表达载体,并在HEK-293T细胞进行转染。结果表明,本研究成功建立了牛CD300a基因SYBR Green I荧光定量PCR检测方法,灵敏性达10拷贝/μL;定量PCR标准曲线的扩增效率E=90.0%,相关系数R²=0.999,表明此方法可用于检测牛CD300a在细胞中的表达。对牛CD300a全基因的克隆测序发现,其基因全长为900bp,含一个跨膜螺旋结构域,在氨基酸序列第182-20...

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

图1牛CD300a普通PCR电泳图

图2pGEM-CD300aPCR电泳图

图3pGEM-CD300a酶切电泳图

图4pGEM-CD300aBLASTn比对结果

本文编号：3887226