伪狂犬病病毒在小鼠体内复制和扩散的可视化研究

发布时间：2024-02-01 15:21

　　伪狂犬病(Pseudorabies,PR)是一种严重危害养猪业的病毒性传染病,该病的病原是伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)。PRV可以感染多种家畜和野生动物,猪是其天然宿主。近年来,疫苗的应用使伪狂犬病得到了有效控制,美国及部分欧洲国家甚至根除了该病。2012年,我国报道了多个接种伪狂犬病Bartha-K61株疫苗的猪场暴发了伪狂犬病新疫情。研究发现,引起此次疫情的PRV毒株发生了多处变异,与经典毒株属于不同的系统发育学分支,且对宿主的致病力增强。目前关于新的PRV流行毒株致病力增强的详细机制仍不清楚,而且毒株具有继续变异的可能。因此,有必要建立快速评估PRV毒株致病力的方法。本研究利用同源重组法构建了能够稳定表达NLuc荧光素酶的重组PRV(rPRVTJ-NLuc),并对该重组病毒的稳定性、生长动力学以及荧光素酶活性进行了系统鉴定,结果表明,与亲本毒株相比,重组病毒可以表达红色荧光蛋白,其在PK-15细胞上具有传代稳定性,且其在PK-15细胞上的复制能力没有发生明显改变,能够表达较高水平的荧光素酶,且荧光素酶水平与病毒滴度呈正相关。将该重组病毒rPRVTJ...

【文章页数】：45 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图2.1表达NLuc的重组PRV的构建策略Fig.2.1SchematicrepresentationoftherecombinantPRVexpressingNLucluciferase

中国农业科学院硕士学位论文如图2.1所示的重组病毒的构建策略，根据PRVTJ（GenBank序列号：KJ789182）US区设计左右同源臂引物P1F/P1R、P2F/P2R（表2.1）。以PRVTJ基因组DNA为模板，PCR扩增获得位于US9基因两侧的....

图2.3重组病毒的蚀斑形成与荧光表达Fig.2.3PlaquesformationandredfluorescenceexpressionofrPRVTJ-NLuc

定测序正确的转移载体转染Vero细胞，24h后即可观察到明显00×），表明成功构建了能够表达DsRed的转移载体。图2.2转移载体转染Vero细胞24h后的荧光表达.2.2Redfluorescenceexpressionofthetra....

图2.2转移载体转染Vero细胞24h后的荧光表达Fig.2.2RedfluorescenceexpressionofthetransfervectorinVerocells24hposttransfection

24h后即可观察到明显的红色荧光（图2.2，放大倍数200×），表明成功构建了能够表达DsRed的转移载体。图2.2转移载体转染Vero细胞24h后的荧光表达Fig.2.2Redfluorescenceexpressionofthetran....

图2.4重组病毒的PCR鉴定

中国农业科学院硕士学位论文将重组病毒在PK-15细胞中连续传代至第20代，提取第1、5、15、20代的病毒基因组，利用引物P4F/P4R、P7F/P7R进行PCR扩增，鉴定重组病毒各代次中报告基因NLuc与DsRed的稳定性。NLuc与DsRed....

本文编号：3892342