布鲁氏菌诊断蛋白的高通量筛选与鉴定

发布时间：2024-02-03 16:12

　　布鲁氏菌病(布病)是由布鲁氏菌引起的世界范围流行的人兽共患病,给畜牧业发展和人民健康带来了巨大的危害。布病的诊断国家标准中所列方法是基于LPS抗原或全菌体蛋白来进行设计的,无法区分疫苗接种与野毒株感染引起的抗体反应,这不利于布病的清除。随着蛋白组学的发展,利用高通量技术筛选具有诊断功能的蛋白分子成为可能。本研究利用免疫沉淀(IP)分离了布鲁氏菌M28和M5-90接种羊180天血清反应蛋白,并利用高通量Label-free技术对其进行质谱分析。结果显示:共检测到1940个有效蛋白,按照差异倍数大于1.5,且在血清持续存在6个月的标准,筛选到71个差异表达蛋白,M28与M5-90相比上调14个,下调有23个,只在M28组表达19个,只在M5-90中表达15个。蛋白B0715、A0248、A0251、A0249、B0713、A0253和A0225在布鲁氏菌接种后6个月内,M28组分别比M5-90组上调46.0、19.6、10.7、8.8、8.8、8.6和7.5倍。为了检测7个差异倍数显著的布鲁氏菌蛋白的抗体反应性及标签蛋白是否影响差异蛋白的抗体反应性,本文选择3种原核系统表达差异蛋白,结合i...

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【部分图文】：

图2-1裂解布鲁氏菌全菌蛋白的方法比较

中国农业科学院硕士学位论文第二章IP筛选与布鲁氏菌阳性血清反应的菌体蛋白92.3.1布鲁氏菌全菌蛋白裂解方法的比较为了获得布鲁氏菌的全菌蛋白，分别用BugbusterMix+超声、BugbusterMix+8M尿素、8M尿素以及BugbusterMix的方法来裂解布鲁氏菌的全菌蛋....

图2-3IP抗体浓度优化

中国农业科学院硕士学位论文第二章IP筛选与布鲁氏菌阳性血清反应的菌体蛋白10图2-2M28和M5-90接种羊血清RBT检测结果Figure2-2RBTtestresultsofM28andM5-90inoculatedsheep2.3.3IP抗体浓度优化为了使布鲁氏菌全菌蛋白与布....

图2-2M28和M5-90接种羊血清RBT检测结果

中国农业科学院硕士学位论文第二章IP筛选与布鲁氏菌阳性血清反应的菌体蛋白10图2-2M28和M5-90接种羊血清RBT检测结果Figure2-2RBTtestresultsofM28andM5-90inoculatedsheep2.3.3IP抗体浓度优化为了使布鲁氏菌全菌蛋白与布....

图2-4IP洗脱液的优化

中国农业科学院硕士学位论文第二章IP筛选与布鲁氏菌阳性血清反应的菌体蛋白111μg/μL（图2-4E），其中1%SDS和50%乙二醇洗脱下来的蛋白量满足测序要求，但由于乙二醇属于有机试剂，对测序造成干扰，因此后续实验选用1%SDS作为本实验的洗脱液。图2-4IP洗脱液的优化Fig....

本文编号：3894379