大豆抗原蛋白对仔猪肠道的致敏作用及ELISA检测方法的建立

发布时间：2024-02-04 01:38

　　大豆中的抗原蛋白能引起机体发生过敏反应,不仅威胁人类的健康,也给畜禽业造成巨大的经济损失。本试验通过高纯度的大豆抗原蛋白致敏仔猪,研究大豆抗原蛋白对仔猪肠道的致敏作用,同时建立一种仔猪大豆抗原蛋白血清抗体间接酶联免疫吸附反应(ELISA)的检测方法,以期为动物大豆抗原蛋白致敏提供临床诊断方法。大豆抗原蛋白对仔猪肠道的致敏作用。试验采取完全随机设计,将30头临床检查健康的21日龄断奶仔猪随机分为3个组,每组10头,分别为对照组、大豆球蛋白(11S)致敏组和β-伴大豆球蛋白(7S)致敏组。在仔猪21-27日龄与32-34日龄时,分别进行初次致敏和再次致敏。其中,11S和7S致敏组,在基础日粮中分别添加4%的11S蛋白和4%的7S蛋白(纯度分别为80%和85%)。在仔猪21、28和35日龄时,用EDTA抗凝管进行前腔静脉采血,用于ELISA试剂盒测定血浆D-乳酸、二胺氧化酶和5-羟色胺含量水平;在仔猪35日龄时,进行皮肤致敏试验；在36日龄时,每组随机选择5头仔猪屠宰,取十二指肠近端、空肠近端、空肠中段、空肠远端、回肠远端各6 cm,用免疫组化方法测定分泌型IgA阳性表达分布及强弱。仔猪大豆...

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
中英文缩写词
文献综述
引言
1 材料与方法
    1.1 试验动物
    1.2 试剂和仪器
        1.2.1 大豆抗原蛋白对仔猪肠道致敏作用试验
        1.2.2 大豆抗原蛋白血清抗体间接ELISA检测方法试验
    1.3 试验分组及方法
    1.4 试验仔猪饲养管理
    1.5 仔猪样品的采集与处理
        1.5.1 仔猪血清的采集与处理
        1.5.2 仔猪血浆的采集与处理
        1.5.3 仔猪肠管的采集与处理
    1.6 大豆抗原蛋白的皮肤致敏试验
    1.7 检测指标及方法
        1.7.1 血浆D-乳酸、二胺氧化酶、5-羟色胺含量水平
        1.7.2 肠道sIgA采用免疫组化PV6000法
    1.8 11S和7S抗原蛋白血清抗体间接ELISA检测方法的建立
        1.8.1 11S和7S抗原包被最佳浓度和酶标抗体稀释最佳浓度的确定
        1.8.2 抗血清的稀释倍数及加样方法
        1.8.3 最佳试验反应条件的标准及其筛选
        1.8.4 11S蛋白和7S蛋白抗血清的交叉反应
        1.8.5 重复性试验
        1.8.6 待检测结果的判定方法
        1.8.7 间接ELISA法检测大豆抗原蛋白抗体方法的应用
    1.9 数据处理
        1.9.1 试验血清指标的结果处理
        1.9.2 组织学图片处理
2 结果与分析
    2.1 大豆抗原蛋白皮肤致敏试验
    2.2 血浆中D-乳酸、二胺氧化酶、5-羟色胺含量水平
        2.2.1 血浆中D-乳酸含量水平
        2.2.2 血浆中二胺氧化酶活力
        2.2.3 血浆中5-羟色胺含量水平
    2.3 肠道分泌型IgA免疫组化阳性表达
        2.3.1 分泌型IgA免疫组化图片
        2.3.2 分泌型IgA免疫组化阳性表达光密度值
    2.4 大豆抗原蛋白间接ELISA检测条件的优化
        2.4.1 11S和7S抗原蛋白间接ELISA酶标抗体的最适稀释倍数的确定
        2.4.2 11S和7S抗原包被最佳浓度和阳性血清最佳稀释倍数的确定
        2.4.3 ELISA最佳反应条件确定
        2.4.4 交叉性试验
        2.4.5 重复性试验
        2.4.6 检测结果的判定标准
        2.4.7 间接ELISA法检测大豆抗原蛋白抗体临床应用的准确性
3 讨论
    3.1 大豆抗原蛋白对皮肤致敏反应
    3.2 大豆抗原蛋白对肠道通透性的影响
    3.3 大豆抗原蛋白对体内5-羟色胺含量水平的影响
    3.4 大豆抗原蛋白对分泌型IgA的影响
    3.5 大豆抗原蛋白血清抗体间接ELISA方法的建立
    3.6 存在的问题
4 结论
参考文献
附录
致谢
作者简介



本文编号：3894982