miRNA-378转基因小鼠的制备、检测及表型初步分析

发布时间：2024-02-15 10:06

　　miRNA对细胞的增殖和分化以及不同阶段的肌肉发育都有着十分重要的调节作用，本研究构建了猪miRNA-378过表达载体，通过转染猪胎儿成纤维细胞系（PEF,porcine embryo fibroblast），在细胞水平验证过表达载体的表达效率。利用原核显微注射技术制备转基因小鼠，通过分子生物学方法分析转基因小鼠的整合效率及表达效率，并对miRNA-378在转基因小鼠上的生物学功能进行初步分析。 从大白猪（sus scrofa）基因组的DNA上扩增miRNA-378扩增前体序列，通过XhoI酶切后回收相应片段，连接到pEGP-miR载体中，成功构建重组载体pEGP-miR-378并转染猪胎儿成纤维细胞系（PEF,porcine embryo fibroblast）,通过荧光观察转染效率及报告基因的表达效率，利用实时荧光定量PCR（QRT-PCR）测定细胞内miRNA-378的表达活性。结果表明，成功构建了重组载体pEGP-miR-378；荧光观察转染后的细胞，显示有较高的转染效率，报告基因有较高的表达效率；QRT-PCR结果显示，试验组较对照组miRNA-378表达显著提高，试验组较对...

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【部分图文】：

图1：let-7RNA表达情况的比较

图1：let-7RNA表达情况的比较Fig.1Comparisonoflet-7RNAexpression（PasquinelliAE,ReinhareBJ,SlackF,etal.,Conservationofthesequenceand....

图2：动物miRNA的生物合成过程

3图2：动物miRNA的生物合成过程Fig2:ThebiogenesisofanimalmiRNAslDP.miRNAsgenomics,biogenesis,mechanism,andfunctio结构保守性多数miRNA来看，他们中大部分都是发....

图3小鼠肌肉发生模式图

Hong2009）。这些由病毒编码的miRNA与宿主基因组不具有同源性，而且至今它们的功能尚不清楚。与之相反的，在细胞的培养的过程中，一种由细胞编码的miRNA-miR-32对PFV-1（primatefoamyvirustype1）的增殖进行调控（Hendr....

图4：原核显微注射法生产转基因羊Fig4:Productionoftransgenicsheepwithpronuclearmicroinjection(Clark,J,Whitelaw,B.,etal.Afuturefortransgeniclivestock.NatRevGenet,2003)

动物中到目前为止，可能并不能得到应用，目前敲除、插入转基因体细胞的是应用较为普遍的（Zhou2003）。1.4.2常见的动物转基因的技术1.4.2.1显微原核注射法显微原核注射法是目前很成熟的一种获得转基因动物的实验技术，其基本操作：在显微镜下，将外源目的基因采用微吸管，注....

本文编号：3899579