猪RANKL在杆状病毒系统中的表达、纯化及其生物学活性分析

发布时间：2024-02-17 20:29

　　核因子κB受体活化因子配体(RANKL)是肿瘤坏死因子家族的重要成员之一,除了在骨免疫学中发挥重要作用外,其在黏膜免疫尤其是在调控M细胞的分化等方面日益受到科学家们的高度关注,而M细胞是肠道黏膜免疫的关键门户。基于此,本研究在体外表达猪源RANKL,纯化后分析其生物学功能,以期为提高猪肠道黏膜免疫应答提供科学依据和物质基础。为获得生物学活性良好的猪RANKL蛋白,本研究采用昆虫/杆状病毒真核表达系统。首先将猪RANKL基因克隆到pFastBacHTA载体后,经PCR鉴定和双酶切验证以及序列测定,最终获得正确的pFastBacHTA-RANKL重组质粒。随后将重组供体质粒pFastBacHTA-RANKL转化至DH10BAC高效感受态细胞制备杆粒,经两轮蓝白斑筛选,选取白色菌落进行扩大培养,采用PCR鉴定,结果表明本试验成功构建了表达猪RANKL的重组杆粒。将重组杆粒转染至sf9昆虫细胞后,观察细胞病变,收获细胞并裂解后采用SDS-PAGE、Western-bloting以及IFA验证目标蛋白的表达状况,结果表明重组杆状病毒能够正确表达猪RANKL蛋白。将接毒后的sf9细胞进行超声裂解,...

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1-1杆状病毒复制周期示意图

中国农业科学院硕士学位论文第一章绪论9因此，由于其宿主的特殊性和对环境和人类健康的安全性，杆状病毒已成功地用作杀虫剂(Chambersetal.,2018)。杆状病毒的基本形态为杆状、有囊膜，囊膜中含有丰富的类脂质和蛋白酶类，但包含体型病毒粒子的囊膜无表面突起。包裹在囊膜中的为病....

图2-1猪、人、鸡大鼠和小鼠RANKL氨基酸序列进化树

中国农业科学院硕士学位论文第二章表达猪RANKL蛋白重组杆状病毒的构建与鉴定19图2-1猪、人、鸡大鼠和小鼠RANKL氨基酸序列进化树Fig.2-1Aphylogenetictreeoftheaminoacidsequencesforporcine,human,chicken,r....

图2-2猪RANKL基因克隆

中国农业科学院硕士学位论文第二章表达猪RANKL蛋白重组杆状病毒的构建与鉴定20CD图2-2猪RANKL基因克隆Fig.2-2PorcineRANKLgenecloningA从pEasyBluntzero-RANKL质粒中成功扩增出RANKL基因B，C构建的pFastBacHTA....

图2-3重组杆粒蓝白斑筛选结果

中国农业科学院硕士学位论文第二章表达猪RANKL蛋白重组杆状病毒的构建与鉴定20CD图2-2猪RANKL基因克隆Fig.2-2PorcineRANKLgenecloningA从pEasyBluntzero-RANKL质粒中成功扩增出RANKL基因B，C构建的pFastBacHTA....

本文编号：3901277