CRISPR/Cas9介导hFAD3基因在奶牛CSN2位点定点整合研究

发布时间：2024-02-18 04:50

　　脂肪酸去饱和酶-3(fatty acid desaturase 3, FAD3)基因编码n-3多不饱和脂肪酸脱氢酶,能够将n-6多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty aci ds, PUFAs)转化成n-3 PUFAs。本试验成功构建基因打靶载体pCSN2-hF AD3和具有切割活性的pCas-Guide-1载体。利用CRISPR/Cas9技术将hFAD3基因定点整合到CSN2位点,研究hFAD3基因在乳腺细胞中特异表达,及其对脂肪酸相关基因表达的影响。结果表明,(1)外源基因已定点整合到了CSN2靶位点。(2)实时定量PCR检测hFAD3基因在转染后乳腺细胞和成纤维细胞中的表达结果显示,乳腺细胞中hFAD3基因的表达量为成纤维细胞中的2.5倍(P<0.01),说明hFAD3基因的表达具有一定的乳腺特异性。(3)脂肪酸含量分析结果显示,转染后细胞n-6/n-3比值较对照细胞显著下降(P<0.01)。(4)脂肪酸相关基因的表达检测结果显示,两种细胞中脂肪分解相关基因(LPL、LIPE和PPARg)表达量大于脂肪合成相关基因(FASN、ACC和SCD)。(...

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
缩略词表
第一部分 研究论文 CRISPR/Cas9介导hFAD3基因在奶牛CSN2位点定点整合研究
    前言
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 方法
            1.2.1 pCas-Guide载体构建及活性检测
            1.2.2 打靶载体的构建
            1.2.3 pCas-Guide-1载体与pCSN2-hFAD3载体共转染HST胎儿成纤维细胞与乳腺细胞及相关检测
    2 结果
        2.1 pCas-Guide载体构建及活性检测
        2.2 打靶载体pCSN2-hFAD3的构建
        2.3 pCas-Guide-1载体与pCSN2-hFAD3载体共转染HST胎儿成纤维细胞与乳腺细胞
            2.3.1 转染后细胞的鉴定及相关检测
            2.3.2 单克隆细胞的筛选及鉴定
    3 讨论
        3.1 β-酪蛋白启动子及其对hFAD3基因表达的调控
        3.2 hFAD3基因表达对细胞中n-6/n-3比例的影响
        3.3 hFAD3基因表达对脂肪酸相关基因表达影响
    4 结论
    参考文献
第二部分 文献综述 n-3 多不饱和脂肪酸去饱和酶基因及乳腺特异启动子研究进展
    1 n-3多不饱和脂肪酸去饱和酶基因研究进展
    2 常用乳腺特异启动子研究进展
    3 乳腺特异表达脂肪酸去饱和酶基因研究进展
    4 结语
    参考文献
致谢
攻读硕士学位期间的学术成果



本文编号：3901927