甘草皂苷对LPS诱导的山羊瘤胃上皮细胞损伤的炎性影响研究

发布时间：2024-02-26 06:17

　　反刍动物瘤胃黏膜由于饲料使用不合理导致瘤胃酸中毒、菌群失调等症状,引起瘤胃免疫屏障损伤,严重影响动物生产性能,甚至导致死亡。本文拟通过体外LPS诱导山羊瘤胃上皮细胞损伤模型,研究甘草皂苷干预该损伤瘤胃上皮细胞模型的炎性因子及NF-κB信号通路表达的影响。分析甘草皂苷对体外LPS诱发的山羊瘤胃炎症反应的免疫调节作用机理,为解决反刍动物养殖过程中瘤胃损伤的预防及研究甘草提取物类饲料添加剂提供新的思路和参考数据。试验一山羊瘤胃上皮原代细胞的分离培养与细胞免疫荧光鉴定本试验体外分离山羊瘤胃上皮细胞,进行体外培养。试验选用健康状况良好的,体重约10 kg的1.5月龄健康的波尔山羊的瘤胃上皮组织,无菌操作成功分离瘤胃上皮细胞。用胰蛋白酶消化细胞,消化下来的细胞在37℃,5%CO₂培养箱中培养。镜下观察,当上皮细胞贴壁程度达到80%⁹0%时,进行细胞传代及纯化,细胞传代培养至第6代开始进行后续试验。以细胞计数法将把细胞密度调整为:1×10³、1×10⁴、1×10⁵、1×10⁶

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图2-1山羊瘤胃组织的清洗和处理

细胞的冻存管放入﹣80℃冰箱里，过夜；天将把细胞移至液氮中，可长期保存。斯倒置显微镜观察山羊瘤胃上皮细胞形态学变化，MTT法16统计，组间差异数据采用SPSSStatistics软件分析。析组织的冲洗和处理瘤胃组织被取出后，先用清水洗净瘤胃，清除瘤胃内饲草颗清洗3....

图2-2瘤胃组织的分离

士学位论文第2章山羊瘤胃上皮原代细胞的分离培养与细胞Fig.2-1Cleaningandhandlingofrumentissueingoats组织的分离看到，瘤胃粘膜被眼科剪刀和眼科镊子剥离或剪成约1㎜3的小碎片

图2-3瘤胃组织胰蛋白酶消化步骤

图2-2瘤胃组织的分离Fig.2-2Isolationofrumentissue组织胰蛋白酶消化步骤体积的两倍添加0.5%的胰蛋白酶/EDTA细胞消化液，用振荡器震荡消化液。消化之后用0.5mm尼龙网过滤5～7次，收集第一次之外的滤养基终止消化（图2-....

图2-4山羊瘤胃上皮细胞计数、传代和纯化培养

图2-4山羊瘤胃上皮细胞计数、传代和纯化培养Fig.2-4Enumeration,passageandpurificationofrumenepithelialcellsingoats羊原代瘤胃上皮细胞形态瘤胃上皮细胞的形态如图2-5所示，刚接种细胞后....

本文编号：3911459