共表达H5N1亚型禽流感病毒同义HA、NA蛋白的DNA疫苗免疫效果评价

发布时间：2024-02-28 21:25

　　禽流感(AI)是由A型流感病毒引起的禽类感染综合征，该病全球范围内皆有发生，其中，H5N1亚型高致病性禽流感(HPAI)以其高发病率和高死亡率而严重威胁着家禽养殖业。DNA疫苗被称为“第三代疫苗”，因其能够同时产生细胞免疫和体液免疫反应、具有良好的交叉免疫保护力，被认为是应对和抵御禽流感病毒(AIV)频繁变异最理想的疫苗。 为了研制能够抵御H5N1亚型不同分支毒株攻击的通用型疫苗，对我国近年来分离到的H5N1亚型AIV的HA蛋白和NA蛋白的氨基酸序列进行了比对分析，获得了一条同义HA蛋白序列和一条同义NA蛋白序列，并分别构建了3种基于同义蛋白的DNA疫苗：pCons-CHA，pCons-CNA和pCons-CHANA。将构建好的3种质粒转染293T细胞，间接免疫荧光和Westernblot实验结果表明，同义HA蛋白和同义NA蛋白均可以在293T细胞中表达，并且表达产物可以同H5N1亚型不同毒株的阳性血清发生特异性的反应，为进一步的免疫评价奠定了基础。 为了探索最佳的免疫方式，对同义HA质粒、同义HA和NA混合质粒以及共表达同义HA、NA质粒的交叉免疫保护效果进行了评价。将30g pCo...

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 禽流感病毒概述
        1.1.1 禽流感的病原学
        1.1.2 禽流感病毒血凝素
        1.1.3 禽流感病毒神经氨酸酶(NA)及对 NA 的免疫应答
        1.1.4 禽流感病毒的传播及其对人类健康的影响
    1.2 禽流感疫苗研究进展
        1.2.1 全病毒灭活苗
        1.2.2 亚单位疫苗
        1.2.3 重组活载体疫苗
        1.2.4 反向遗传疫苗
    1.3 DNA 疫苗的研究进展
        1.3.1 DNA 疫苗的主要特点
        1.3.2 DNA 疫苗的基本原理
        1.3.3 流感病毒 DNA 疫苗研究进展
        1.3.4 提高 DNA 疫苗免疫原性的方式
    1.4 本研究的目的与意义
第二章 表达 H5N1 亚型 AIV 同义 HA 和 NA 蛋白重组质粒的构建及体外表达
    2.1 材料与方法
        2.1.1 菌株，细胞与质粒
        2.1.2 酶及主要试剂
        2.1.3 血清与抗体
        2.1.4 主要仪器
        2.1.5 H5 亚型 AIV 同义 HA 蛋白及同义 NA 蛋白氨基酸同义序列分析与合成
        2.1.6 重组质粒 pCons-CHA, pCons-CNA 的构建与鉴定
        2.1.7 共表达同义 HA 和 NA 基因重组质粒 pCons-CHANA 的构建与鉴定
        2.1.8 间接 NA-ELISA 检测方法的建立
        2.1.9 重组质粒体外表达的间接免疫荧光鉴定
        2.1.10 重组蛋白的 Western Blot 鉴定
    2.2 结果
        2.2.1 重组质粒 pCons-CHA, pCons-CNA 的鉴定
        2.2.2 重组质粒 pCons-CHANA 的鉴定
        2.2.3 重组质粒 pGEX-CNA 的鉴定
        2.2.4 间接 NA-ELISA 检测方法的建立
        2.2.5 间接免疫荧光(IFA)检测结果
        2.2.6 Western Blot 鉴定结果
    2.3 讨论
第三章 不同 DNA 疫苗(组合)对 SPF 鸡的免疫效力评估
    3.1 材料与方法
        3.1.1 病毒、抗原
        3.1.2 DNA 疫苗
        3.1.3 SPF 鸡胚和 SPF 鸡
        3.1.4 病毒鸡胚半数致死量 EID50的测定
        3.1.5 试验分组情况
        3.1.6 SPF 鸡免疫方法与免疫程序
        3.1.7 HI 抗体的测定
        3.1.8 NA-ELISA 抗体的测定
        3.1.9 攻毒保护实验
        3.1.10 病毒分离与滴定
    3.2 结果
        3.2.1 鸡胚半数致死量 EID50的测定
        3.2.2 DNA 疫苗超螺旋含量的检测
        3.2.3 不同疫苗(组合)对 DK/GD/322/2010 的免疫保护效力评估
        3.2.4 不同疫苗(组合)对 DK/HuB/S1513/2010 的免疫保护效率评估
        3.2.5 不同疫苗(组合)对 CK/SD/A-10/2011 的免疫保护效率评估
        3.2.6 不同疫苗(组合)对 DK/FJ/31/2007 的免疫保护效率评估
    3.3 讨论
第四章 全文结论
参考文献
致谢
作者简历



本文编号：3914003