传染性法氏囊病病毒主要结构蛋白VP2、VP1和VP2-VP1串联基因的原核表达及其初步应用

发布时间：2024-04-17 22:30

　　为获得传染性法氏囊病病毒(IBDV)特异性抗体检测用抗原VP2、VP1及VP2-VP1蛋白,分别设计引物扩增IBDV野毒株NN1172的VP2和VP1基因,并扩增VP2和VP1基因中抗原性和亲水性较好的重要区域,通过PCR扩增基因串联方法对截短的VP2和截短的VP1基因进行串联,首次获得VP2-VP1串联基因,并对VP2、VP1和VP2-VP1串联基因进行了原核表达和鉴定。结果成功构建了原核表达载体pET-VP2、pET-VP1和pET-VP2-VP1;诱导表达条件显示,3个重组质粒分别转入BL21菌株后经0.05 mmol/L IPTG诱导表达,分别得到分子量为69、114和63 kDa的VP2、VP1和VP2-VP1重组蛋白,且均以包涵体形式表达,3个重组蛋白分别于诱导后5、3和6 h时表达量最多。Western blot结果显示,表达的VP2、VP1和VP2-VP1蛋白与鸡抗IBDV阳性血清均具有良好的反应原性。以纯化的VP2、VP1和VP2-VP1蛋白作为包被抗原对传染性支气管炎病毒(IBV)、呼肠孤病毒(ReoV)、禽白血病病毒(ALV)和新城疫病毒(NDV)4种阳性血清检测...

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 病毒、菌株及IBDV阳性血清
    1.2 主要试剂
    1.3 引物的设计与合成
    1.4 重组表达质粒的构建
        1.4.1 IBDV VP2、VP1和VP2-VP1串联基因的扩增
        1.4.2 重组表达质粒的构建与鉴定
    1.5 VP2、VP1和VP2-VP1串联基因的诱导表达
        1.5.1 诱导表达及其条件的优化
        1.5.2 分析重组蛋白表达形式
    1.6 纯化重组蛋白
    1.7 表达蛋白的Western blot分析
    1.8 表达蛋白的特异性及其临床初步应用
2 结果
    2.1 重组表达质粒的构建及鉴定
    2.2 诱导表达条件的优化
    2.3 表达蛋白的可溶性分析
    2.4 重组表达蛋白的纯化
    2.5 表达蛋白Western blot鉴定结果
    2.6 表达蛋白的临床初步应用分析
3 讨论



本文编号：3957021