重组狂犬病病毒的拯救及其矿化疫苗的生物学特性研究

发布时间：2024-05-18 19:15

　　狂犬病是由狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)感染引起的以侵犯中枢神经系统为主的致死性人畜共患传染病。RABV可以感染人及所有温血动物,引起狂犬病,一旦发病致死率几乎可达100%。本研究利用反向遗传操作,通过将绿色荧光蛋白(GFP)基因克隆到狂犬病病毒载体的N和P基因之间,并且在Vero E6细胞上进行重组病毒拯救,成功的拯救出携带GFP基因的重组狂犬病病毒rSAD-GFP,并对重组病毒的生物学特性进行了研究。通过测定病毒滴度,绘制生长曲线,病毒滴度测定结果表明重组病毒与亲本病毒在Vero E6细胞的生长特性基本一致,两种病毒生长没有显著性差异;重组病毒在Vero细胞连续传代数代,未发现外源基因丢失的现象。将拯救的重组病毒rSAD-GFP通过脑内注射的方法感染BALB/C小鼠,通过该试验评价重组病毒的致病性,小鼠在重组病毒攻击后,无可见的临床症状和死亡现象,表明拯救的重组病毒属于弱毒毒株。在构建rSAD-GFP毒株成功的基础上,我们利用该质粒,构建含有矿化基因W6的重组质粒,并对外源矿化基因的插入位置进行了一系列的研究,获得了不同的重组质粒,转染Vero E6细胞,但是未能...

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1.1狂犬病在全球的分布（Fooksetal2014）

全球一共有150个国家或地区报道过狂犬病的发生，如图1.1所示，其中绝大多数病例集中在非洲、亚洲及拉丁美洲地区，患病人数居于前两位的国家为印度和中国，流浪狗是主要的狂犬病感染动物。2013年WHO(WHO,2013)报导全球近60000人死于狂犬病，大部分是非洲和亚....

图1.2狂犬病毒粒子的结构模式图（MatthiasJ.Schnelletal.2010）

图1.2狂犬病毒粒子的结构模式图（MatthiasJ.Schnelletal.2010）Fig.1.2Structureofrabiesvirusvirion犬病病毒的基因组结构ABV的基因组为不分节段的单股负链RNA，大约12kb左右，编码病毒....

图2.1SAD毒株与重组SAD-GFP毒株的基因结构

2.1.2方法2.1.2.1含有GFP基因的全长cDNA的构建重组全长cDNA构建示意图见图2.1。利用本实验室保存的含有GFP基因的质粒为模板，PCR扩增目的基因GFP。扩增GFP基因的引物序列为：上游引物G....

图2.2GFP的PCR扩增结果

文第二章携带GFP基因的重组狂犬病病增和重组质粒的构建CR扩增，将PCR产物进行核酸凝胶电泳鉴定，片段相符，阴性对照并无任何条带。将PCR产测序，测序结果表明片段未突变，将提取的质粒泳，纯化回收目的片段。使用T4DNA连接酶进行酶切鉴定，结果见图2.3。....

本文编号：3977238