利用猪全基因组CRISPR/Cas9敲除文库筛选猪流感病毒复制必需宿主基因

发布时间：2024-05-19 08:18

　　猪流感(Swine influenza,SI)是由猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV)引起的猪的一种呼吸道传染病,其发病率可高达100%。猪流感常常继发于猪繁殖与呼吸综合征、支原体肺炎、圆环病等,之后会引起免疫损伤,进而延长呼吸道疾病的病程,提高死亡率。因此,在规模化养猪场中,猪流感普遍存在且难以根除,对生猪养殖产业具有重大威胁。A型流感是一种重要的人畜共患病,而猪又是禽、猪、人流感病毒共同的易感宿主,是流感病毒基因重组或重配的“混合器”以及产生流感病毒新流行毒株的“孵育器”,因此猪感染流感病毒后使病毒极易发生跨种传播。基于猪流感在我国乃至世界范围内对生猪健康高效养殖以及公共卫生产生的重大威胁,预防和控制猪流感病毒的流行具有至关重要的意义。本研究利用已有的猪肾细胞CRISPR/Cas9全基因组敲除文库(PK-15-GeCKO)筛选当前较为流行的欧亚禽系猪流感病毒复制必需的宿主基因。并在稳定表达Cas9蛋白的PK-15细胞系(PK-15-Cas9)上单个敲低筛选到的某些基因的表达,初步验证敲低该基因后抗流感病毒效果。同时为了更接近自然感染状态,选择新生猪气管上...

【文章页数】：84 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1-1A型流感病毒粒子结构示意图(McHardyandAdams2009)

图1-1A型流感病毒粒子结构示意图(McHardyandAdams2009)Fig.1-1SchematicrepresentationofaninfluenzaAvirion(McHardyandAdams2009)1.1.2流感病毒基因组....

图1-2A型流感病毒生命周期示意图(TeVelthuisandFodor2016)

利用猪全基因组CRISPR/Cas9敲除文库筛选猪流感病毒复制必需宿主基因在哺乳动物细胞中，PA的T552S突变提高了病毒聚合酶的复制能力，而在禽源细胞上没有观察到此突变导致的影响(Mehleetal.2012)。H1亚型病毒的HA中E190D/G225D....

图1-3流感病毒与宿主因子互作网络(Brassetal.2009)

图1-3流感病毒与宿主因子互作网络(Brassetal.2009)g.1-3Interactionnetworkbetweeninfluenzavirusandhostfactors(Brassetal.2009.5流感病毒相关宿主基因组学研....

图1-4CRISPR-Cas9产生的DSBs和DNA修复的示意图(JiangandDoudna2017)

华中农业大学2019届硕士研究生学位论文内的gRNA序列，CRISPR/Cas9几乎可以针对任意基因组序基因在靶位点产生双链断裂(double-strandbreak,DSB)(Jinek生激活DNA的自身修复机制：在提供供体时，激活的是无错路，通过同源重组产生....

本文编号：3977848