驴乳溶菌酶原核表达及活性检测

发布时间：2024-06-02 19:47

　　为探究驴乳源溶菌酶特性,本研究人工合成了驴乳溶菌酶基因DKLYSC1,并连入原核表达载体pET32a(+)中经诱导、表达,通过SDS-PAGE、western blot及比浊法检测重组溶菌酶表达及活性。结果显示,重组溶菌酶主要以包涵体形式高效表达,分子质量约31 ku;纯化的重组蛋白可以与抗His标签抗体特异性结合,特异性较强;比浊法测定复性蛋白比酶活为124.74 U/mg。本研究在大肠杆菌中表达了驴乳溶菌酶,并获得具有活性的复性蛋白,为驴乳溶菌酶的基础研究和应用奠定了基础。

【文章页数】：4 页

【部分图文】：

图1pET32a-DKLYZC1载体的PCR鉴定（A）及酶切（B）鉴定

pUC59-DKLYSC1经NcoI和XhoI双酶切后，将获得的目的片段克隆至原核表达载体pET32a（+），构建重组质粒pET32a-DKLYSC1。构建的重组质粒经PCR扩增结果显示，在450bp左右获得与目的片段大小一致的条带（图1A）；该质粒经NcoI和XhoI....

图2重组蛋白DKLYSC1表达的SDS-PAGE检测（A）及纯化蛋白的westenblot鉴定（B)

重组蛋白N端带有His标签，利用Ni柱参照包涵体蛋白纯化方法获得纯化的重组包涵体蛋白。westernblot检测结果显示，在31ku处出现特异性条带（图2B）。表明重组蛋白DKLYSC1具有较强的反应原性。将纯化的重组蛋白利用尿素法进行透析复性，获得了纯度高的复性蛋白，但浓度....

本文编号：3987700