巴马小型猪内源性反转录病毒的整合对HEK293细胞周期、细胞凋亡和相关基因表达的影响

发布时间：2024-06-04 23:21

　　检测广西巴马小型猪内源性反转录病毒(PERV)整合到HEK293细胞基因组(HEK293-PERV-BM)后,宿主细胞的细胞周期、细胞凋亡及cyclin D1、CDK4、c-Myc、p53、p16和k-Ras等相关基因表达的改变,推测相关作用机制。检测发现P10代巴马小型猪内源性反转录病毒感染HEK293细胞模型(HEK293-PERV-BM)的细胞周期主要被阻滞在S期和G2/M期,细胞凋亡受到抑制,P25代细胞周期主要被阻滞在S期,细胞凋亡明显受到诱导。通过实时荧光定量PCR和Western blot检测发现细胞周期相关基因的表达与细胞感染模型传代次数(P1～P35)有密切关系,其中cyclin D1、c-Myc和k-Ras基因表现为先降低后升高,而CDK4和p16基因则恰好相反,同时,p53基因表达的改变不明显,据此可以推测P10代细胞周期的改变可能由Rb调控通路诱导发生,P25代细胞周期的改变可能由Rb调控通路与p53调控通路协同诱导发生。上述结果提示PERV的感染可能存在潜在的危险。

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【部分图文】：

图1HEK293-PERV-BM细胞感染模型细胞周期

表1PERV-BM和PERV-PK的整合对细胞周期和细胞凋亡的影响组别细胞周期细胞凋亡G0/G1期S期G2/M期HEK29349.33±0.8231.81±2.3715.18±1.7426.02±2.73HEK293-PERV-BMP1028.65....

图2HEK293-PERV-BM的细胞凋亡

应用SYBRGreenI实时荧光定量PCR分别检测HEK293和各代次HEK293-PERV-BM中cyclinD1、CDK4、c-Myc、p53、p16和k-Ras基因mRNA的表达。结果如图3所示,与HEK293细胞相比,PERV整合后,各代次细胞感染模型中上述基因的相....

图3各代HEK293-PERV-BM细胞感染模型中cyclinD1(A)、CDK4(B)、c-Myc(C)、p53(D)、p16(E)和k-Ras(F)的实时荧光定量PCR检测

图2HEK293-PERV-BM的细胞凋亡2.4各代HEK293-PERV-BM细胞感染模型中cyclinD1、CDK4、c-Myc和k-Ras基因mRNA蛋白表达

图4各代HEK293-PERV-BM细胞感染模型中cyclinD1、CDK4、c-Myc和k-Ras的Westernblot检测

在实时荧光定量PCR检测中,发现cyclinD1、CDK4、c-Myc和k-Ras基因在HEK293-PERV-BM细胞感染模型P1、P15、P25和P30的相对表达量差异较大,因此检测这4个基因在上述代次的细胞感染模型中蛋白水平的改变。Westernblot检测发现P1、....

本文编号：3989313