弓形虫病免疫胶体金诊断试纸条的研制

发布时间：2024-06-10 18:38

　　弓形虫(T.gondii)病是一种呈世界性分布的人畜共患病,人群感染普遍,对孕妇和免疫力低下者,危害很大;200多种动物都能感染该病,多数呈隐性感染,但猪暴发感染弓形虫后,可引起大批死亡。弓形虫病严重威胁着人类的健康,同时也给畜牧业造成了很大的损失。目前,临床上诊断弓形虫病,依赖于血清学诊断,主要包括间接血凝试验、间接荧光抗体试验、染色试验和酶联免疫吸附试验,但这些免疫检测技术费时、费力,还需要特殊仪器设备辅助,不适合大面积推广应用。胶体金技术是一种新型快速诊断技术,已经在弓形虫病的诊断上得到使用,临床检测时操作简便、快速,无需相关专业的技术人员和贵重的仪器设备,适合于基层大面积检测、普查等,从而得到了快速发展。临床上诊断弓形虫病时经常检测血清中的抗体,但是抗体可以在体内长期存在,不能区分现症感染或既往感染,而弓形虫循环抗原存在于急性感染弓形虫病的血清中,适合急性病的诊断。本研究利用胶体金标记技术,运用免疫学方法,根据层析原理,结合单克隆抗体制备和选用新材料等多种方法,建立了一种新的检测弓形虫循环抗原的试纸条诊断方法。利用本实验室制备和保存的D5和B6两株杂交瘤细胞株,分别制备、纯化抗...

【文章页数】：77 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２－１?含有弓形虫速殖子的腹腔液（１０Ｘ４０）??Ｆｉｇ．?２－１?Ｔｈｅ?ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ?ｆｌｕｉｄ?ｏｆ?ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ?ｔａｃｈｙｚｏｉｔｅ?（１０ｘ４０）??

２．３．２速殖子可溶性抗原、纯化后的单抗Ｄ５、Ｂ６浓度??经ＢＣＡ蛋白浓度试剂盒测定后，根据标准蛋白浓度的测定结果（见表２－１），绘制标??准曲线（见图２－２），由测得的速殖子抗原、单抗Ｄ５、单抗Ｂ６的０Ｄ５ｄｌ，带入公式得到的??浓度分别为：〇？?６７?ｍｇ／ｍＬ、１．?９６?....

图２－２蛋白浓度标准曲线??Ｆｉｇ．?２－２?Ｔｈｅ?ｓｔａｎｄａｒｄ?ｃｕｒｖｅ?ｏｆ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ??

?；??Ｖ每??图２－１?含有弓形虫速殖子的腹腔液（１０Ｘ４０）??Ｆｉｇ．?２－１?Ｔｈｅ?ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ?ｆｌｕｉｄ?ｏｆ?ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ?ｔａｃｈｙｚｏｉｔｅ?（１０ｘ４０）??２．３．２速殖子可溶性抗原、纯化后的单抗Ｄ５、Ｂ６浓度??经ＢＣＡ蛋白浓度试剂盒测定....

图２－３?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳结果??

Ｂ６?单抗?１．９８６?１．７６３?１．２７５?０．８５３?０．６３２?０．３２１?１．０８９?０．０６４?０．０９１??２．３．５?Ｄ５、Ｂ６单抗纯度的鉴定??通过ＳＤＳ－－ＰＡＧＥ电泳分析单抗纯化前后的纯度，见图２－３，初步提纯后腹水中杂蛋??白明显减少，而亲和层析后没有杂蛋....

图３－１试纸条组装示意图??

胶体金试纸条主要由样品垫、结合垫、ＮＣ膜、吸水纸和ＰＶＣ底板按一定的顺序组??装而成。各部分均需要按一定规格裁剪，并通过不同方式处理。??如图３－１所示：样品垫、结合垫、玻璃纤维膜、吸水纸依次粘贴组装到ＰＶＣ底板（长??７．?２Ｘ宽０．５?ｃｍ）上，相接的两个重叠为１ｍｍ，同时在....

本文编号：3991743