NA蛋白氨基酸位点突变对H9N2亚型AIV传播特性和致病力的影响

发布时间：2024-10-04 18:16

　　近几年来，禽流感病毒（Avian Influenza，AIV)在全世界范围内流行，是养禽业面临的一个巨大挑战。其中H9N2亚型AIV是目前亚洲分布最为广泛的一个低致病性禽流感亚型。虽然低致病性禽流感病毒在临床上主要表现为死亡率不高，但是当和其他细菌、病毒微生物共感染时，容易导致疫病的发生，继而出现较高的发病率和死亡率；该亚型病毒也能够感染人引起人的呼吸系统感染和结膜炎等，即属于人兽共患病病原。研究发现，中国大陆1998年H9N2亚型禽流感病毒大流行的原因是因为病毒获得了气溶胶传播的特性，并且其传播特性和致病能力可能是NA基因结构决定。然而，在NA基因水平上对气溶胶传播及致病力的研究甚少，因此本实验利用反向遗传技术构建重组病毒，然后利用H.E染色及免疫组化技术和气源性传播实验模型研究H9N2亚型AIV气源性传播及其致病力之间的差异。 一、R01/NASS和R01/NASS-381重组株病毒的拯救 本实验通过基因克隆的方法，利用自己优化设计的带有BsmBI/AarI/BsaI酶切位点的引物以及Webster赠送的流感病毒8质粒系统反向遗传双向转录/表达载体pHW2000，构建出含有Pol...

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【学位级别】：硕士

【文章目录】：
基金资助 符号说明 中文摘要 Abstract 1 前言
1.1 禽流感病毒概述
    1.1.1 禽流感病毒病原
    1.1.2 禽流感病毒理化特性
    1.1.3 禽流感病毒的临床症状及组织变化
1.2 反向遗传技术
    1.2.1 应用于禽流感病毒的反向遗传技术的研究进展
    1.2.2 反向遗传技术应用于禽流感病毒传染及致病力方面的的研究
1.3 禽流感病毒的气源性传播
1.4 禽流感病毒的致病能力
    1.4.1 血凝素
    1.4.2 神经氨酸酶
1.5 目的与意义 2 材料与方法
2.1 材料
    2.1.1 禽流感病毒株
    2.1.2 SPF 鸡胚和 SPF 鸡
    2.1.3 标准阳性血清和细胞
    2.1.4 主要试剂及配制方法
    2.1.5 主要仪器
2.2 方法
    2.2.1 H9N2 亚型禽流感病毒的增殖
    2.2.2 SD01 株 8 基因转录/表达质粒和 SS94 株 NA 基因转录/表达质粒的构建
    2.2.3 SS94 株 NA 基因的定点突变
    2.2.4 转染质粒的提取
    2.2.5 病毒拯救过程
    2.2.6 拯救病毒株的 RT-PCR 鉴定
    2.2.7 重组病毒的复制能力及 EID50测定
    2.2.8 动物传播实验
    2.2.9 重组病毒的毒力测定 3 结果与分析
3.1 转录/表达质粒的鉴定
3.2 NA 基因突变位点的鉴定
3.3 氨基酸定点突变鉴定结果
3.4 重组病毒 HA-Test 及 EID50测定
3.5 两株病毒株对四周龄 SPF 鸡气源性传播能力的影响
    3.5.1 隔离器中 H9N2 AIV 气溶胶的检测结果
    3.5.2 SPF 鸡口咽泄殖腔棉拭子的检测结果
    3.5.3 SPF 鸡抗体水平的检测结果
3.6 两重组病毒株对 4 周龄 SPF 鸡各组织致病力的结果
    3.6.1 各重组病毒株病毒感染鸡的主要临床症状及主要剖检变化
    3.6.2 各重组株病毒 H.E 染色观察组织病理学变化
    3.6.3 两重组株病毒免疫组化染色观察各组织抗原分布 4 讨论 5 结论 参考文献 致谢 攻读学位期间论文发表情况



本文编号：4007000