枸杞多糖对山羊精原干细胞凋亡抑制及冷冻保存效果的影响

发布时间：2024-12-24 22:06

　　精原干细胞（SSCs）是唯一能将遗传物质传递给后代的雄性生殖干细胞,目前已被应用于雄性生殖系统疾病治疗和基因编辑动物生产等领域。但是,由于SSCs数量稀少,仅占睾丸细胞的0.02%⁰.03%,严重制约了其应用。因此,需要在体外进行SSCs培养促进其增殖,以获取足够数量的细胞进行相关研究。目前,关于SSCs体外培养的研究多集中在啮齿类动物及灵长类动物上。早在2005年,小鼠SSCs便可在体外长期培养并被定向诱导分化为精子,且移植到生殖缺陷小鼠睾丸内后可繁衍出后代。相较于啮齿类动物,山羊等大型家畜SSCs体外培养技术起步晚,技术尚不成熟,需要进一步研究完善。枸杞多糖（Lyciujm BarbarumPolysaccharides,LBP）是从枸杞中提取出来的一种生物活性物质,具有抗氧化应激、抗肿瘤、调节免疫功能、提高生殖功能等作用,常应用于动物细胞体外培养中。然而,目前LBP的对山羊SSCs的体外培养及冷冻保存的作用效果尚不明确。为了研究LBP对山羊SSCs体外增殖及冷冻保存效果的影响,本研究首先将LBP进行液相色谱分析以研究其复杂的成分组成,然后采用30～45日龄的山...

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
主要符号对照表
第一章 精原干细胞的研究进展
    1.1 精原干细胞的来源与精子发生
        1.1.1 精原干细胞的来源
        1.1.2 精子发生
    1.2 精原干细胞的分离与纯化
        1.2.1 精原干细胞的分离
        1.2.2 精原干细胞的纯化
    1.3 影响精原干细胞体外增殖的因素
        1.3.1 血清与培养基
        1.3.2 生长因子
        1.3.3 饲养层
        1.3.4 其他因素
    1.4 生殖细胞冷冻保存
第二章 枸杞多糖生物活性的研究进展
    2.1 抑制细胞凋亡
    2.2 抑制癌细胞生长
    2.3 修复细胞损伤
    2.4 改善细胞免疫功能
    2.5 促进细胞增殖
    2.6 本研究的目的和意义
        2.6.1 研究的目的
        2.6.2 研究的意义
第三章 山羊精原干细胞的分离纯化与鉴定
    引言
    3.1 材料与方法
        3.1.1 试验材料
        3.1.2 试验方法
    3.2 结果与分析
        3.2.1 枸杞多糖红外光谱分析及液相色谱分析
        3.2.2 山羊精原干细胞提取与纯化
        3.2.3 山羊精原干细胞的鉴定
    3.3 讨论
    3.4 小结
第四章 枸杞多糖对山羊精原干细胞增殖及凋亡的影响
    引言
    4.1 材料与方法
        4.1.1 试验材料
        4.1.2 试验方法
        4.1.3 数据分析
    4.2 结果与分析
        4.2.1 不同浓度LBP对 SSCs增殖的影响
        4.2.2 细胞内MDA、SOD、T-AOC含量
        4.2.3 细胞内凋亡和抗凋亡基因的表达
        4.2.4 细胞内凋亡和抗凋亡蛋白的表达
    4.3 讨论
    4.4 小结
第五章 枸杞多糖对山羊精原干细胞冷冻保存的作用
    引言
    5.1 材料与方法
        5.1.1 试验材料
        5.1.2 试验方法
        5.1.3 数据分析
    5.2 结果与分析
        5.2.1 解冻后SSCs活率
        5.2.2 细胞内MDA、SOD、T-AOC含量
        5.2.3 解冻后凋亡及抗凋亡基因表达情况
    5.3 讨论
    5.4 小结
结论与创新点
    结论
    创新点
    下一步研究计划
参考文献
附录
    附录 A 主要溶液配制
    附录 B 山羊SSCs细胞中总RNA的提取
    附录 C cDNA第一链的合成
    附录 D 实时荧光定量PCR(Real-time PCR)
致谢
个人简历



本文编号：4019991