广东TTSuV s 流行病学调查与TTSuV 2 ORF1抗原性分析

发布时间：2025-01-06 02:17

　　输血传播病毒(Transfusion transmitted virus, TTV)是一种小的,无囊膜的,单股环状负链的人畜共患DNA病毒,TTV的发现是于1997年底由NiShizawa运用代表性差异分析技术(Representational difference analysis)从一名非甲一庚型肝炎病人的血清中克隆得到的病毒DNA片段,随后,人们在非灵长类以及猪、牛、羊、犬,猫、家禽等多种家养及野生动物体内也发现了TTV的感染。猪源TTV (TTSuVs)在世界范围内广泛检出,引起人们的极大关注。目前TTSuVs的诊断主要依赖DNA的检测,由于猪源TTV具有潜在的危害,因此对其抗原性进行分析是非常必要的。本实验利用基因重组技术将TTSuV2ORF2基因克隆至原核表达系统中,制备获得了具有生物学活性的重组Cap蛋白,并进行了免疫原性研究,主要研究内容如下： 1、为了解广东省猪群中猪输血传播病毒(TTSuVs)的感染情况,本研究采用Nest-PCR方法对广东省7个不同地区规模化猪场抽检采集的159份育肥猪血清进行检测。结果表明,TTSuVs的两个种TTSuV1和TTSuV26(?)...

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

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目录
摘要
ABSTRACT
第一篇 文献综述
    第一章 猪输血传播病毒的研究进展
        1 病原学
            1.1 TTV的理化特性
            1.2 TTV的分类
            1.3 TTV的结构功能
        2 TTSuV_s的传播方式与传播途径
        3 TTSuV_s的流行病学调查
        4 TTV的致病性
        5 TTV的检测方法
            5.1 套式PCR
            5.2 多重PCR
            5.3 荧光定量PCR
            5.4 滚环复制
            5.5 血清学诊断方法
    参考文献
第二篇 试验研究
    第一章 广东TTSuV_s流行病学调查及其主要抗原编码区进化分析
        摘要
        1 材料和方法
            1.1 样品采集
            1.2 菌株,质粒与试剂
            1.3 血清样品DNA的提取
            1.4 TTSuV₁与TTSuV₂的PCR诊断
            1.5 结果鉴定与数据统计
            1.6 TTSuV_sORF1的扩增与同源性分析
        2 结果
            2.1 样品的PCR检测结果
            2.2 TTSuV_s检测结果统计分析
            2.3 TTSuV_sORF1的同源性分析
        3 讨论
        参考文献
        ABSTRACT
    第二章 广东一株TTSuV₂ORF1的生物信息学特性分析及其蛋白表达
        摘要
        1 材料和方法
            1.1 样品
            1.2 试剂与仪器
            1.3 TTSuV₂ ORF1的序列分析
            1.4 TTSuV₂ ORF2基因的扩增、纯化及回收
            1.5 原核表达载体pET21b-ORF1-VP1与pET21b-ORF1-VP2的构建和鉴定
            1.6 重组质粒的诱导表达和纯化
            1.7 包涵体膜蛋白的洗涤
            1.8 重组表达蛋白的回收与纯化
            1.9 Western-blotting检测重组蛋白
        2 结果
            2.1 序列分析
            2.2 目的片段的获得
            2.3 重组表达质粒的构建和鉴定
            2.4 重组蛋白的诱导表达和可溶性分析
            2.5 重组表达蛋白的回收与纯化
            2.6 Western-blotting检测重组蛋白的表达
        3. 讨论
        参考文献
        ABSTRACT
    第三章 间接ELISA检测方法对TTSuV₂ ORF1抗原表位的筛选与分析
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
            1.3 血清样本中病毒DNA的和抗TTSuV₂抗体的检测
            1.4 商品化ELISA试剂盒检测血清样本中其它病毒的阳性率
        2. 结果与分析
            2.1 抗原与血清
            2.2 血清样本中病毒DNA的和抗TTSuV₂抗体的检测
            2.3 商品化ELISA试剂盒检测血清样本中其它病毒的阳性率
        3 讨论
        参考文献
        ABSTRACT
全文总结
致谢
攻读硕士学位期间发表的论文



本文编号：4023636