猪链球菌2型新型溶血相关基因鉴定及功能研究

发布时间：2025-01-06 23:52

　　猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)是一种重要的人畜共患病病原,能引起猪脑膜炎、败血症、关节炎等多种病症。在33个血清型中,猪链球菌2型(Streptococcus suis type2,SS2)流行最广、毒力最强。近年来,SS2引起的猪链球菌病在我国有两次暴发流行,造成巨大经济损失,带来严重公共卫生问题。尽管已报道了多种该菌的毒力因子,其致病机理仍不清晰。本研究以SS2新型溶血相关基因Hhly3为研究对象,通过构建基因缺失突变株,比较生物学特性,研究Hhly3在SS2致病过程中的作用。研究结果丰富了对该菌致病机理的认识。 1、猪链球菌2型新型溶血相关基因分布及蛋白定位 我国近两次流行的SS2菌株有89K PAI这一重要毒力标志。Hhly3基因是通过差减抑制杂交筛选到的位于89K PAI上的SS2可能毒力基因。本实验通过基因序列分析,克隆表达,基因分布检测,蛋白定位检测等方法鉴定Hhly3基因。实验结果表明：Hhly3基因编码78kDa蛋白,含有8段跨膜结构,与溶血素Ⅲ型超家族有共同的保守区域。待检31株S.suis菌株中,Hhly3主要存在于SS2中国...

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
目录
摘要
ABSTRACT
英文缩写词表
第一篇 文献综述
    第一章 猪链球菌2型致病机理及细菌溶血素研究进展
        1 猪链球菌病
        2 猪链球菌2型主要致病机理
            2.1 对上皮组织的定植、粘附及侵袭
            2.2 在血液中的存活及扩散
            2.3 炎症反应及感染性休克
            2.4 CNS侵袭及脑膜炎
        3 细菌溶血素
            3.1 溶血素的分类
            3.2 猪链球菌溶血素
            3.3 其他重要溶血素
    参考文献
第二篇 试验研究
    第二章 猪链球菌2型新型溶血相关基因分布及蛋白定位
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 菌株和质粒
            1.2 试剂与仪器
            1.3 序列分析
            1.4 基因分布检测
            1.5 HHLY3克隆及表达
            1.6 SS2 HHLY3蛋白定位检测
        2 实验结果
            2.1 序列分析
            2.2 基因分布检测
            2.3 重组表达质粒鉴定
            2.4 SDS-PAGE及Western blotting分析
            2.5 兔rHHLY3多克隆抗体制备
            2.6 SS2的HHLY3蛋白定位
        3 讨论
        参考文献
        Abstract
    第三章 猪链球菌2型Hhly3基因缺失株的构建及生物学特性分析
        摘要
        1. 材料与方法
            1.1 菌株、质粒及试剂
            1.2 缺失载体构建
            1.3 基因缺失株的构建
            1.4 基因互补株的构建
            1.5 基因突变株遗传稳定性鉴定
            1.6 基因突变株形态学及生长特性比较
            1.7 溶血特性比较
            1.8 全血存活实验
            1.9 酸度实验
            1.10 生物被膜形成能力比较
            1.11 粘附实验
            1.12 毒力相关基因的表达分析
            1.13 斑马鱼毒力实验
        2 实验结果
            2.1 基因缺失质粒及互补质粒的鉴定
            2.2 互补质粒的鉴定
            2.3 基因缺失株筛选及鉴定
            2.4 互补株的鉴定
            2.5 缺失株和互补株形态学及生长特性分析
            2.6 缺失株和互补株溶血特性比较
            2.7 全血存活试验
            2.8 酸碱耐受程度检测
            2.9 生物被膜形成能力比较
            2.10 细胞粘附试验
            2.11 毒力相关基因的表达分析
            2.12 斑马鱼毒力实验
        3 讨论
        参考文献
        Abstract
    第四章 Hhly3-ref双基因缺失株的构建及特性分析
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 菌株、质粒及试剂
            1.2 基因缺失载体构建
            1.3 双基因缺失株的构建及鉴定
            1.4 双基因缺失株生物学特性分析
        2 实验结果
            2.1 基因缺失质粒的鉴定
            2.2 双基因缺失株筛选及鉴定
            2.3 双基因缺失株生物学特性分析
        3 讨论
        参考文献
        Abstract
全文总结
致谢



本文编号：4024179