A型塞内卡病毒VP2蛋白阻断ELISA检测方法的建立

发布时间：2025-01-10 21:04

　　 为了建立一种检测A型塞内卡病毒(SVA)VP2蛋白抗体的阻断ELISA方法,试验用SVA VP2蛋白作为抗原包被酶标板,采用棋盘法确定最佳蛋白包被浓度和单克隆抗体最佳稀释倍数。同时对阻断ELISA的其他条件(封闭液、血清稀释度、底物反应条件)进行优化,对方法的特异性和重复性进行考察。结果表明:VP2蛋白最佳包被浓度为0.5μg/mL;最佳封闭液为2%BSA,每孔200μL,37℃封闭1 h;待检血清最佳稀释度为1∶1,在37℃条件下作用1 h;单克隆抗体最佳稀释度为1∶40 000,在37℃条件下作用1 h;底物最佳反应条件为室温避光10 min。特异性试验结果显示,SVA阳性血清与猪伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综征病毒、猪瘟病毒、猪口蹄疫病毒、猪流行性腹泻病毒阳性血清均无交叉反应。批间、批内重复性试验结果的变异系数均小于10%。对200份猪血清样本进行荧光抗体中和试验和阻断ELISA方法检测,符合率为96.0%。说明该ELISA方法具有良好的特异性和重复性,可用于塞内卡病毒血清抗体检测和流行病学调查。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 蛋白质、细胞及血清
    1.2 主要试剂
    1.3 阻断ELISA检测方法的建立
    1.4 阻断ELISA检测方法的优化
        1.4.1 阻断ELISA抗原包被浓度和酶标抗体最佳稀释倍数的确定
        1.4.2 血清最佳稀释度
        1.4.3 封闭液的选择
        1.4.4 最佳显色时间的选择
        1.4.5 阴性、阳性判断标准的确定
    1.5 阻断ELISA特异性试验
    1.6 阻断ELISA重复性试验
    1.7 临床血清样品的检测
2 结果与分析
    2.1 阻断ELISA最佳反应条件的确定
    2.2 阻断ELISA临界值的确定
    2.3 阻断ELISA特异性试验
    2.4 阻断ELISA重复性试验
    2.5 临床血清样品的检测
3 讨论



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