镉致大鼠肝BRL 3A细胞的毒性机理及NAC的保护作用

发布时间：2025-01-18 13:16

　　镉(cadmium, Cd)是一种有毒的重金属元素,易在体内蓄积,镉能够诱导多种器官或组织损伤并导致相关功能丧失,包括肾脏、肝脏、肺脏、骨骼、心血管系统和免疫系统。体内外研究均证明,镉可引起细胞凋亡、氧化损伤及DNA损伤,且凋亡与氧化应激、线粒体损伤、促分裂原激活蛋白激酶(MAPK)、死亡受体、Caspase及非Caspase依赖性通路的激活密切相关。肝脏是镉损伤的主要靶器官之一,目前对镉致肝细胞损伤研究较多,但其作用机制还不完全清楚。本研究以大鼠肝细胞系BRL3A细胞为模型,采用细胞生物学和分子生物学方法研究镉对BRL3A细胞的毒性作用机制及NAC的保护作用。研究内容如下： 1.镉致BRL3A细胞毒性损伤及NAC的保护作用 为研究镉致BRL3A细胞的毒性损伤及NAC的保护作用,以0、10、20、40μmol/L醋酸镉分别作用BRL3A细胞12h(分别为a-d组),同时以2mmol/LNAC、2mmol/L NAC(预孵育30min)+20μmol/L醋酸镉分别作用BRL3A细胞12h(为e-f组)。倒置显微镜观察细胞形态的变化,采用MTT法测定细胞存活率,比色法测定培养上清...

【文章页数】：111 页

【学位级别】：博士

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中文摘要
ABSTRACT
目录
符号说明
第一部分 文献综述
    第一章 镉毒性机理研究进展
        1. 镉及其污染现状
        2. 镉的毒性危害
        3. 镉的毒性机理
            3.1 镉与氧化应激
            3.2 镉与DNA损伤
            3.3 镉与细胞凋亡
            3.4 镉与细胞周期
        4. 总结
    第二章 N-乙酰半胱氨酸的研究进展
        1. NAC的药理特性
        2. NAC的作用机制
            2.1 抗氧化作用
            2.2 对肿瘤的作用
            2.3 对NF-κB的影响
            2.4 对凋亡的影响
            2.5 其它作用
        3. NAC对肝脏的保护作用
        4. 结语
第二部分 研究内容
    第一章 镉致BRL 3A细胞毒性损伤及NAC的保护作用
        1. 材料和方法
            1.1 细胞系
            1.2 主要试剂与仪器
            1.3 主要溶液的配制
            1.4 细胞培养与分组
            1.5 细胞处理后形态学观察
            1.6 BRL 3A细胞存活率检测
            1.7 BRL 3A细胞上清中LDH活性测定
            1.8 统计学分析
        2. 结果
            2.1 镉对细胞形态学的影响及NAC的保护作用
            2.2 镉对细胞存活率的影响及NAC的保护作用
            2.3 镉对细胞培养上清液中LDH活性的影响及NAC的保护作用
        3. 讨论
    第二章 镉致BRL 3A细胞的凋亡及NAC的保护作用
        1. 材料与方法
            1.1 细胞培养与分组
            1.2 主要试剂与仪器
            1.3 主要溶液的配制
            1.4 BRL 3A细胞凋亡形态学观察
            1.5 流式细胞仪检测BRL 3A细胞凋亡率
            1.6 统计学分析
        2. 结果
            2.1 镉对细胞核形态学的影响及NAC的作用
            2.2 镉对细胞凋亡率的影响及NAC的作用
        3. 讨论
    第三章 镉致BRL 3A细胞DNA损伤的研究
        1.材料与方法
            1.1 细胞培养与分组
            1.2 主要试剂与仪器
            1.3 主要溶液的配制
            1.4 彗星实验
            1.5 统计学分析
        2. 结果
            2.1 彗星图像的观察
            2.2 细胞彗星率的检测
            2.3 拖尾细胞尾长和尾部DNA含量
        3. 讨论
    第四章 镉致BRL 3A细胞氧化损伤及NAC的保护作用
        1. 材料与方法
            1.1 细胞培养与分组
            1.2 主要试剂与仪器
            1.3 主要溶液的配制
            1.4 细胞内ROS含量的测定
            1.5 细胞SOD,GSH-Px活力和MDA含量的测定
        2. 结果
            2.1 BRL 3A细胞内ROS含量变化
            2.2 细胞内SOD和GSH-Px活性的变化
            2.3 细胞内MDA含量的变化
        3. 讨论
            3.1 镉对细胞ROS的影响及NAC的保护作用
            3.2 镉对细胞SOD、GSH-Px活性和MDA含量的影响及NAC的保护作用
    第五章 镉致BRL 3A细胞线粒体损伤及NAC的保护作用
        1. 材料与方法
            1.1 细胞培养与分组
            1.2 主要试剂与仪器
            1.3 细胞线粒体超微结构观察
            1.4 流式细胞仪检测细胞膜电位
            1.5 免疫荧光检测AIF、Endo G的表达
            1.6 Caspase 3和Caspase 9活性的测定
            1.7 实时荧光定量PCR检测Bax、Bcl-2 mRNA的表达
            1.8 免疫印迹检测Bax、Bcl-2、Caspase 3、Caspase 9和PARP蛋白表达
        2. 结果
            2.1 细胞线粒体膜电位的变化
            2.2 细胞线粒体超微结构的变化
            2.3 细胞AIF、EndoG荧光测定
            2.4 细胞Caspase 3、9活性测定
            2.5 细胞Bax、Bcl-2蛋白表达水平的检测
            2.6 细胞Caspase 3、Caspase 9和PARP蛋白表达水平检测
            2.7 BRL 3A细胞mRNA提取结果
            2.8 BRL 3A细胞Bax、Bcl-2 mRNA表达水平检测
        3. 讨论
            3.1 镉对BRL 3A细胞线粒体的影响及NAC的保护作用
            3.2 镉对BRL 3A细胞AIF、EndoG蛋白的影响
            3.3 镉对BRL 3A细胞凋亡的线粒体途径的影响及NAC的保护作用
    第六章 镉对BRL 3A细胞MAPK信号通路的影响及NAC的保护作用
        1. 材料与方法
            1.1 细胞培养与分组
            1.2 主要试剂与仪器
            1.3 流式细胞仪检测细胞凋亡率
            1.4 免疫印迹检测JNK、ERK、p38、P-JNK、P-ERK和P-p38蛋白表达
        2. 结果
            2.1 抑制剂对细胞凋亡率的影响
            2.2 镉对BRL 3A细胞MAPK蛋白表达的变化
        3. 讨论
    第七章 镉对BRL 3A细胞Fas/FasL途径的影响及NAC的保护作用
        1. 材料与方法
            1.1 细胞培养与分组
            1.2 主要试剂与仪器
            1.3 Caspase 8活性测定
            1.4 免疫印迹检测Caspase 8、FasL蛋白表达
            1.5 实时荧光定量PCR检测Fas、FasL mRNA的表达
        2. 结果
            2.1 镉对BRL 3A细胞Caspase 8活性的影响
            2.2 BRL 3A细胞Caspase 8、FasL蛋白表达水平的变化
            2.3 BRL 3A细胞Fas、FasL mRNA表达的变化
        3. 讨论
全文结论
参考文献
致谢
攻读博士期间发表的学术论文



本文编号：4028661