玉米赤霉烯酮对雄性小鼠血睾屏障的影响研究

发布时间：2017-06-16 09:08

  本文关键词：玉米赤霉烯酮对雄性小鼠血睾屏障的影响研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：世界范围内受霉菌毒素污染的农作物越来越多,其中玉米赤霉烯酮是最具农业经济重要性的霉菌毒素之一。不仅能够引起机体各系统的疾病,还会降低畜牧生产,增加卫生保健和兽医医疗的投入。近年来,玉米赤霉烯酮的生殖毒性受到国内外广泛的关注,血睾屏障是当前研究外源性毒物对雄性生殖损害的热点问题。ZEN对雄性的生殖毒性是否是通过破坏血睾屏障,其毒性作用机制需要进一步的探究讨论。急性攻毒试验选取清洁级昆明系8周龄雄性小鼠95只,随机分成五组：25 mg/kg、50 mg/kg、75 mg/kg ZEN处理组、溶剂对照组、空白对照组,进行腹腔注射染毒,每天一次,连续5天,于末次染毒24小时后摘眼球采血并脱颈处死动物,分离睾丸和附睾,测定脏器系数、精液品质,睾丸酶的活力以及血清睾酮和雌激素的质量浓度,qPCR检测Vim、Cldn11和N-cad mRNA的表达水平。慢性攻毒试验选取清洁级昆明系8周龄雄性小鼠75只,随机分成五组：25 mg/kg、50 mg/kg、75 mg/kg ZEN处理组、溶剂对照组、空白对照组,经口途径染毒28天,处死动物后,除了检测上述指标,还测定肝肾功能指标,制作睾丸组织切片,qPCR检测Vim、Cldn11、N-cad、StAR和Cyp11al mRNA的表达水平。急性攻毒结果显示：与对照组相比,ZEN显著地降低小鼠的体重和精液品质,睾丸乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)的活力随着染毒剂量的增加显著升高,血清睾酮和雌激素浓度显著下降,RT-PCR结果表明Vim和Cldn11相对表达量呈上升趋势,N-cad的表达下调。慢性攻毒结果显示：与对照组相比,ZEN显著地降低精液品质和血清睾酮和雌激素质量浓度,损害肝肾功能,碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)的活力略有上升,睾丸乳酸脱氢酶(LDH)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)呈下降趋势,高剂量组的睾丸病理切片可见生精细胞减少、排列混乱,RT-PCR结果表明Vim、StAR和Cyp11al的表达下调,而Cldn11和N-cad的相对表达量略有上升。以上结果表明：ZEN急性和慢性攻毒作用均能够显著降低雄性小鼠的精子品质,以及血清睾酮和雌二醇的质量浓度,影响睾九标志酶的活力。ZEN急性攻毒作用能够上调Vim和Cldn11 mRNA的表达,下调N-cad的表达,这可能与机体自愈性的适应机制有关,通过加强关键性基因的表达,延长血睾屏障的重建周期,以保护生精细胞免受外源性毒物的侵害。ZEN慢性攻毒作用能够下调Vim. StAR和Cyp11al mRNA的表达,Cldn11和N-cad随着染毒剂量的增加呈现上升的趋势,这表明ZEN对血睾屏障造成严重的损害,通过机体自愈适应性应答,不足以抵御毒物的破坏和侵袭。
【关键词】：玉米赤霉烯酮 睾丸 精液品质 血睾屏障
【学位授予单位】：沈阳农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S859.87
【目录】：

• 摘要10-11
• Abstract11-13
• 第一章 文献综述13-24
• 1.1 玉米赤霉烯酮生殖毒性的研究进展13-17
• 1.1.1 玉米赤霉烯酮的理化特性13
• 1.1.2 玉米赤霉烯酮的主要作用机制13-15
• 1.1.3 玉米赤霉烯酮的生殖毒性15-17
• 1.2 血睾屏障的研究进展17-23
• 1.2.1 血睾屏障的结构基础17-21
• 1.2.2 血睾屏障的功能21-23
• 1.3 本课题的研究目的和意义23-24
• 第二章 玉米赤霉烯酮对雄性小鼠生殖系统的急性攻毒作用24-44
• 2.1 材料与方法24-30
• 2.1.1 试验动物24
• 2.1.2 主要试验仪器24
• 2.1.3 主要药品与试剂24-25
• 2.1.4 主要试剂的配制25
• 2.1.5 分组和给药25
• 2.1.6 样本采集和处理25
• 2.1.7 小鼠的生长状况观察25-26
• 2.1.8 睾丸与附睾的脏器指数检测26
• 2.1.9 精液品质的检测26
• 2.1.10 血清睾酮和雌二醇的检测26
• 2.1.11 睾丸标志酶的活力检测26-27
• 2.1.12 睾丸组织总RNA的抽提27
• 2.1.13 睾丸组织RNA的检测27-28
• 2.1.14 睾丸组织RNA的反转录28
• 2.1.15 设计合成引物28-29
• 2.1.16 荧光定量PCR检测29-30
• 2.1.17 数据统计与分析30
• 2.2 结果与分析30-40
• 2.2.1 小鼠生长状态的观察结果30-31
• 2.2.2 小鼠睾丸和附睾脏器系数的测定结果31
• 2.2.3 精液品质的检测结果31-32
• 2.2.4 血清睾酮和血清雌二醇的含量结果32-33
• 2.2.5 睾丸标志酶的检测结果33-35
• 2.2.6 睾丸组织总RNA的电泳结果35
• 2.2.7 Vim、Cldn11、N-cad和β-actin基因扩增产物的测序与比对35-36
• 2.2.8 小鼠睾丸组织β-actin、Vim、Cldn11和N-cad基因qPCR引物的特异性和标准曲线36-39
• 2.2.9 小鼠睾丸组织中Vim、Cldn11和N-cad基因的相对表达量39-40
• 2.3 讨论40-43
• 2.3.1 不同水平玉米赤霉烯酮对雄性小鼠生长状况的影响40-41
• 2.3.2 不同水平玉米赤霉烯酮对雄性小鼠血清激素水平的影响41
• 2.3.3 不同水平玉米赤霉烯酮对雄性小鼠精液品质的影响41-42
• 2.3.4 不同水平玉米赤霉烯酮对雄性小鼠睾丸标志酶的影响42
• 2.3.5 不同水平玉米赤霉烯酮对雄性小鼠Vim、Cldn11和N-cad基因相对表达量的影响42-43
• 2.4 小结43-44
• 第三章 玉米赤霉烯酮对雄性小鼠生殖系统的慢性攻毒作用44-63
• 3.1 材料与方法44-49
• 3.1.1 试验动物44
• 3.1.2 主要试验仪器44
• 3.1.3 主要药品与试剂44
• 3.1.4 主要试剂的配制44-45
• 3.1.5 分组和给药45
• 3.1.6 样本采集和处理45
• 3.1.7 小鼠的生长状况观察45-46
• 3.1.8 睾丸与附睾的脏器指数检测46
• 3.1.9 精液品质的检测46
• 3.1.10 血清睾酮和雌二醇的检测46
• 3.1.11 血清肝功能和肾功能检测46
• 3.1.12 睾丸标志酶的活力检测46-47
• 3.1.13 睾丸组织病理学检查47-48
• 3.1.14 睾丸组织总RNA的抽提48
• 3.1.15 睾丸组织RNA的检测48
• 3.1.16 睾丸组织RNA的反转录48
• 3.1.17 设计合成引物48
• 3.1.18 荧光定量PCR检测48
• 3.1.19 数据统计与分析48-49
• 3.2 结果与分析49-58
• 3.2.1 小鼠生长状态的观察结果49
• 3.2.2 小鼠睾丸和附睾脏器系数的测定结果49-50
• 3.2.3 精液品质的检测结果50
• 3.2.4 血清睾酮和雌二醇的含量结果50-51
• 3.2.5 小鼠肝肾功能的检测结果51-52
• 3.2.6 睾丸标志酶的检测结果52-53
• 3.2.7 小鼠睾丸组织的病理学观察结果53-54
• 3.2.8 睾丸组织总RNA的电泳结果54
• 3.2.9 Vim、Cldn11、N-cad、StAR、Cyplla1和β-actin基因扩增产物的测序与比对54-55
• 3.2.10 小鼠睾丸组织β-actin、Vim、Cldn11、N-cad、StAR和Cyplla1基因qPCR引物的特异性和标准曲线55-57
• 3.2.11 小鼠睾丸组织中Vim、Cldn11、N-cad、StAR和Cyplla1基因的相对表达量57-58
• 3.3 讨论58-61
• 3.3.1 不同水平玉米赤霉烯酮对雄性小鼠生长状况的影响58-59
• 3.3.2 不同水平玉米赤霉烯酮对雄性小鼠血清激素水平的影响59
• 3.3.3 不同水平玉米赤霉烯酮对雄性小鼠精液品质的影响59
• 3.3.4 不同水平玉米赤霉烯酮对雄性小鼠肝肾功能的影响59-60
• 3.3.5 不同水平玉米赤霉烯酮对雄性小鼠睾丸标志酶的影响60
• 3.3.6 不同水平玉米赤霉烯酮对雄性小鼠Vim、Cldn11、N-cad、StAR和Cyplla1基因相对表达量的影响60-61
• 3.4 小结61-63
• 结论63-64
• 参考文献64-70
• 英文缩写词表70-71
• 致谢71-72
• 攻读学位期间发表文章72

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