多药耐药相关蛋白（MRPs）基因家族在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达模式及其临床意义

发布时间：2017-10-09 12:07

  本文关键词：多药耐药相关蛋白（MRPs）基因家族在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达模式及其临床意义

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【摘要】：本论文包括三个部分：（一）多药耐药相关蛋白（MRPs）基因家族6个家族成员（MRP1-6）基因荧光定量RT-PCR的优化；（二）儿童急性淋巴细胞白血病MRP1的表达及意义；（三）儿童急性淋巴细胞性白血病MRP2-6的表达及意义。 第一部分多药耐药相关蛋白（MRPs）基因家族荧光定量RT-PCR的优化 目的：通过定量PCR技术检测MRP1-6基因mRNA在白血病细胞株中的表达水平，优化荧光定量RT-PCR的条件，鉴定引物的特异性，为研究MRP1-6基因在儿童急性淋巴细胞性细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia, ALL）中的表达及意义提供基础。 方法：培养和收集3株白血病细胞株为模板，提取总RNA，逆转录合成cDNA，优化实时定量RT-PCR条件，通过测定MRP1-6基因在各个细胞株中的表达水平和溶解曲线分析，鉴定MRP1-6基因引物的特异性。 结果：MRP1-6基因引物具有特异性，通过优化荧光定量RT-PCR条件为研究MRPs在儿童ALL中的表达奠定了基础。 第二部分儿童急性淋巴细胞白血病MRP1基因的表达及临床意义 目的：多药耐药相关蛋白基因（multidrug resistance associated protein-1，MRP1）在多种肿瘤中高表达，与肿瘤多药耐药具有密切相关性。通过定量PCR检测儿童急性淋巴细胞细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia，ALL）MRP1基因mRNA的表达水平，分析其在儿童ALL中的表达特点及临床意义。 方法：收集2013年期间在苏州大学附属儿童医院诊断和治疗的ALL患儿146例（初诊=67例，完全缓解=70例，复发=9例），10例特发性血小板减少性紫癜（idiopathicthrombocytopenic purpura，ITP）患儿骨髓为对照。应用定量RT-PCR方法检测MRP1基因的表达水平，利用SPSS18统计学软件，分析MRP1基因表达水平与儿童ALL临床预后指标的相关性。 结果：(1)初诊组和复发组MRP1的中位表达水平分别为5.82和8.49，明显高于完全缓解组（1.99），P值均＜0.05；其中复发组表达水平最高。(2) MRP1的表达水平与ALL危险程度具有密切相关性，低危组表达水平最低、中危组居中、高危组最高，，中位数依次为4.28、5.62和7.56，中危组与标危组、高危组与标危组之间的差异具有统计学意义，P值分别为0.015、0.007。(3)以中位表达水平为界将初诊患儿分为高、低表达量两组，高表达组（n=34例）第7天强的松预处理敏感率为70.6%，而低表达组（n=33例）敏感率为90.9%，P=0.035；第33天骨髓完全缓解率高表达组为64.7%，低表达组为87.9%，P=0.026；第15天骨髓完全缓解率高表达组为68.8%，低表达组为69.7%，P=0.664。（4）初诊T-ALL组（n=10例）MRP1的表达水平高于B-ALL组（n=57例），中位数分别为7.71和5.18，差异有统计学意义（P=0.007）。（5）单因素分析显示MRP1mRNA表达水平与患儿性别、年龄、初诊时白细胞计数、血红蛋白、血小板计数、外周血涂片幼稚细胞比例及骨髓涂片幼稚细胞比例无相关性。 结论：在儿童急性淋巴细胞性白血病中，MRP1的表达与免疫分型、治疗反应、危险程度及疾病复发密切相关，是ALL预后差的有效指标。 第三部分儿童急性淋巴细胞白血病MRP2-6的表达及临床意义 目的：MRP2-6基因在多种肿瘤中高表达，与肿瘤多药耐药具有密切相关性，目前有关它们在儿童ALL中的表达及意义国内鲜见报道，使用荧光定量PCR检测MRP2-6mRNA在儿童ALL中的表达水平，分析其在儿童ALL中的表达特点及临床预后指标的相关性。 方法：于2013年收集在苏州大学附属儿童医院诊断和治疗的ALL患儿133例（初诊=56例，完全缓解=68例，复发=9例），10例特发性血小板减少性紫癜（idiopathicthrombocytopenic purpura，ITP）患儿骨髓为对照。应用定量RT-PCR方法检测MRP2-6基因的表达水平，利用SPSS18统计学软件，分析它们在儿童ALL预后指标的相关性。 结果：(1)初诊组MRP2基因的中位表达水平最高（2.99），复发组次之（1.18）完全缓解组最低（1.17），但各组比较差异无统计学意义，P值分别为0.065和0.763；完全缓解组MRP3基因的中位表达水平为2.09，高于初诊组、复发组，后两者中位表达水平分别为0.52和0.38，且初诊组与完全缓解组之间差异有统计学意义，P值＜0.001；MRP4在初诊组和复发组的中位表达水平分别为2.46和5.47，均高于完全缓解组（1.64），差异有统计学意义，P值分别为0.039、0.029，以复发组表达水平最高；MRP5的在儿童ALL中的表达模式与MRP4相似，其中位表达水平在初诊组和复发组分别为1.60和3.84，高于完全缓解组（0.91），且差异有统计学意义，P值分别为0.003、0.002，以复发组表达水平最高； MRP6的中位表达水平在复发组最高，为2.0，高于初诊组、完全缓解组，后二者分别为0.56和1.13，但差异无统计学意义。(2)最终危险程度分级显示MRP2和MRP5的表达在中危组最高，分别为4.62和1.71，但与低危组、高危组比较没有统计学意义；MRP4的中位表达水平以高危组最高，但与中危组、低危组比较，差异无统计学意义。（3）以MRP2-6mRNA中位表达水平为界，将初诊ALL患儿分为高、低表达组，分析它们在3个治疗反应评估点（第7天、15天和33天）的表达差异，发现没有统计学意义。且与免疫分型没有相关性。（4）单因素分析显示MRP2与初诊时血小板计数呈负相关、MRP4与性别具有有关性。 结论：在儿童急性淋巴细胞性白血病中，MRP2-6mRNA的表达水平具有不同的表达模式，其中MRP4和MRP5mRNA的表达水平在疾病复发时最高。
【关键词】：多药耐药相关蛋白基因家族（MRPs 基因） 引物 荧光定量 RT-PCR（qRT-PCR） 白血病细胞株 儿童 急性淋巴细胞白血病 MRP1基因 定量RT-PCR 治疗反应 儿童 急性淋巴细胞白血病 MRP2-6基因 定量RT-PCR 复发
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R733.71
【目录】：

• 中文摘要4-8
• Abstract8-13
• 前言13-16
• 参考文献14-16
• 第一部分 多药耐药相关蛋白（MRPs）基因家族荧光定量 RT-PCR 的优化16-23
• 一、材料和方法16-20
• 二、结果20-21
• 三、讨论21-22
• 参考文献22-23
• 第二部分 儿童急性淋巴细胞白血病 MRP1 的表达及临床意义23-36
• 一、材料和方法23-27
• 二、结果27-30
• 三、讨论30-32
• 参考文献32-36
• 第三部分 儿童急性淋巴细胞白血病 MRP2-6 的表达模式及其临床意义36-51
• 一、材料和方法36
• 二、结果36-46
• 三、讨论46-48
• 参考文献48-51
• 综述51-73
• 参考文献61-73
• 英汉双解缩略词表73-74
• 攻读学位期间发表的论文74-75
• 致谢75-76

【参考文献】

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本文编号：1000098