肌肉注射人脐带间充质干细胞对阿霉素扩张型心肌病大鼠心肌微血管新生的影响

发布时间：2017-10-19 22:41

  本文关键词：肌肉注射人脐带间充质干细胞对阿霉素扩张型心肌病大鼠心肌微血管新生的影响

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【摘要】：目的:探讨经肌肉注射途径移植人脐带间充质干细胞(h UC-MSCs)对阿霉素扩张型心肌病大鼠的治疗效应及对心肌微血管再生的影响。方法:100只SPF级健康SD大鼠随机分为2组:正常对照组(15只)和扩张型心肌病组(简称DCM组,85只)。DCM组大鼠采用2mg/kg阿霉素每周1次,连续8周建立扩张型心肌病模型。模型建立成功2周后,成活的60只大鼠随机分为DCM模型对照组(DMEM组,2ml DMEM);h UC-MSCs低剂量组(低剂量组,1×106 h UC-MSCs);h UC-MSCs高剂量组(高剂量组10×106 h UC-MSCs)。干细胞治疗4周后,心脏超声评估大鼠心功能;酶联免疫竞争法(EIA)检测血浆BNP水平;免疫组化标记CD34检测心肌微血管密度以及电镜观察微血管结构;实时定量PCR检测心肌Slit-2、Robo-1与Robo-4表达水平,Western blot检测心肌HGF、LIF及VEGF蛋白含量。结果:在h UC-MSCs移植4周后,心脏超声提示低剂量组与高剂量组大鼠左室射血分数(LVEF)与治疗前对比明显上升[(66.10±1.93)%至(72.27±2.44)%,P0.01;(66.31±2.97)%至(70.92±2.68)%,P0.01];左室短缩率(LVFS)前后对比也出现上升[(31.00±1.71)%至(34.96±2.08)%,P0.05;(31.57±2.45)%至(33.49±2.19)%,P0.05)];DMEM组大鼠LVEF、LVFS均呈下降趋势,但差异无统计学意义(P0.05)。大鼠血浆BNP水平明显下降,低剂量组由(352.68±41.25)pg/ml至(202.68±20.38)pg/ml,P0.01;高剂量组由(355.79±48.32)pg/ml至(193.62±15.41)pg/ml,P0.01;DMEM组则继续上升,由(365.42±61.81)pg/ml至(431.26±52.80)pg/ml,P0.05。低剂量组与高剂量组大鼠心肌微血管密度与DMEM组对比也明显增多[(84.00±19.18)/mm2与(86.67±20.88)/mm2比(27.14±13.97)/mm2,P0.01],DMEM组与正常组大鼠对比无明显差异[(27.14±13.9)/mm2 vs(16.43±5.71)/mm2,P0.05)];给予不同剂量h UC-MSCs移植的大鼠电镜下心肌微血管的损害程度均要轻于给予DMEM注射的大鼠。与DMEM组大鼠对比给予h UC-MSC移植的大鼠心肌Slit-2与Robo-1的表达水平明显升高;而Robo-4在各组大鼠间表达水平均差异均无统计学意义。HGF、VEGF与LIF在低剂量组与高剂量组大鼠心肌含量均高于DMEM组(P0.01)。结论:肌肉注射h UC-MSCs能够明显改善阿霉素诱导的DCM大鼠心脏功能;并且可以上调Slit-2、Robo-1、HGF、LIF与VEFG在大鼠心肌中的表达促进大鼠心肌微血管再生。h UC-MSCs可能通过旁分泌大量细胞因子从而发挥对心脏疾病的治疗效应。
【关键词】：人脐带间充质干细胞 扩张型心肌病 微血管 肌肉注射
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R725.4
【目录】：

• 中英文缩略词汇总表2-3
• 摘要3-5
• Abstract5-9
• 引言9-11
• 第一章 材料和方法11-25
• 1.1 材料11-14
• 1.1.1 研究对象11
• 1.1.2 主要仪器11-12
• 1.1.3 主要试剂12-14
• 1.1.3.1 模型建立与干细胞治疗的主要试剂12-13
• 1.1.3.2 大鼠心肌组织免疫组化的主要试剂13
• 1.1.3.3 大鼠心肌电镜检测的主要试剂13
• 1.1.3.4 大鼠心肌组织PCR检测的主要试剂13
• 1.1.3.5 大鼠心肌组织Western Blot检测的主要试剂13-14
• 1.2 方法14-25
• 1.2.1 实验分组与流程14-16
• 1.2.2 大鼠DCM模型建立方法16
• 1.2.3 hUC-MSCs移植方法16
• 1.2.4 各项指标的检测方法16-24
• 1.2.4.1 大鼠心脏超声检查16
• 1.2.4.2 大鼠血浆脑利钠肽含量测定16-18
• 1.2.4.3 心肌电镜检查18
• 1.2.4.4 免疫组化标记CD34测定大鼠心肌微血管密度18-19
• 1.2.4.5 PCR检测大鼠心肌Slit-2、Robo-1、Robo-4 mRNA的表达19-21
• 1.2.4.6 Western Blot检测大鼠心肌HGF、VEGF、LIF蛋白表达量21-24
• 1.2.4.7 免疫组化检测CD133在心肌组织中的表达水平24
• 1.2.5 统计学方法24-25
• 第二章 结果25-40
• 2.1 大鼠一般情况25-27
• 2.1.1 建模过程中大鼠一般情况25
• 2.1.2 hUC-MSCs治疗后大鼠一般情况及生存分析25-27
• 2.2 心脏超声结果27-31
• 2.2.1 首次给药10周后大鼠心脏超声结果27-28
• 2.2.2 hUC-MSCs治疗后大鼠心脏超声结果28-31
• 2.3 大鼠血浆BNP结果31-33
• 2.3.1 建模后大鼠血浆BNP结果31
• 2.3.2 hUC-MSCs治疗后血浆BNP结果31-33
• 2.4 干细胞治疗后大鼠心肌微血管的变化33-35
• 2.4.1 电镜下大鼠心肌微血管结构变化33-34
• 2.4.2 hUC-MSCs治疗后大鼠心肌微血管密度的变化34-35
• 2.5 hUC-MSCs移植后大鼠心肌组织中相关因子的表达变化35-38
• 2.5.1 PCR检测大鼠心肌Slit-2，，Robo-1 及Robo-4 mRNA表达结果35-36
• 2.5.2 大鼠心肌HGF、VEGF及LIF蛋白检测结果36-38
• 2.6 干细胞治疗与CD133在心肌中表达水平的关系38-40
• 第三章 讨论40-48
• 3.1 脐带间充质干细胞对受损心脏的修复作用40-41
• 3.2 脐带间充质干细胞促进心肌微血管的再生41-44
• 3.3 干细胞的旁分泌机制44-46
• 3.4 心脏干细胞或前体细胞促进心肌修复46-48
• 第四章 结论48-49
• 参考文献49-54
• 综述54-65
• 综述参考文献61-65
• 攻读学位期间发表的论文65-66
• 致谢66-67

【共引文献】

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本文编号：1063797