HIV暴露婴儿早期诊断策略研究与HIV-1 DNA滤纸片干血斑质控品的制备及应用

发布时间：2017-10-21 16:28

  本文关键词：HIV暴露婴儿早期诊断策略研究与HIV-1 DNA滤纸片干血斑质控品的制备及应用

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【摘要】：第一部分HIV暴露婴儿早期诊断策略研究研究背景HIV/AIDS (人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus)/艾滋病(Acquired Immune Deficiency Syndrome. AIDS))是全球面临的重大公共卫生问题,同样也严重威胁着妇女和儿童的健康与生命。由于HIV感染母亲的特异性抗体可进入胎／婴儿体内,通常至婴儿出生后12-18个月才能消失,因此常规的HIV抗体检测(成人HIV感染诊断标准方法)无法准确诊断18月龄内的HIV感染婴儿,而延误其开始抗病毒治疗的最佳时机。在发达国家,HIV核酸检测(检测细胞中HIV-1前病毒DNA或血浆内HIVRNA)是1 8月龄内,特别是出生后数周内婴儿HIV感染诊断的常规检测方法。近年来随着HIV核酸检测能力的提高和以滤纸为载体的干血斑(DBS)技术的应用,极大地提高了HIV核酸检测的可及性,以HIV DNA定性检测为依据的婴儿HIV感染早期诊断检测逐渐在资源有限国家中得到广泛应用。本文对2005年至2015年在中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心参比实验室进行HIV-1 DNA定性检测的共计2575份HIV暴露婴儿干血斑样本,将检测结果按HIV暴露婴儿的月龄进行分组,计算并分析检测结果的灵敏度、特异度和约登指数,为我国HIV暴露婴儿早期诊断策略的改进提供依据。目的对HIV暴露婴儿不同月龄的干血斑样本进行核酸定性检测及分析,探索改进HIV暴露婴儿早期诊断策略。对象和方法收集整理2005年至2015年曾在中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心参比实验室检测的HIV阳性孕产妇所生1161名婴儿出生后不同时间点的干血斑样本2575份,按HIV暴露婴儿的月龄进行分组,使用雅培m2000系统进行定性检测并分析。以HIV暴露婴儿18月龄后的抗体检测结果作为判定是否感染HIV的金标准。分别计算HIV暴露婴儿出生后不同月龄核酸定性方法检测干血斑样本的结果的灵敏度、特异度和约登指数,整理并进行分析。结果1)对于HIV暴露婴儿出生后小于4周的样本,灵敏度为50%(11/22),95%可信区间(Confidence interval,CI):0.288-0.712；特异度100%(174/174),95%Ch0.968～1.000；假阳性率：0；假阴性率50%；约登指数为0.5002)大于等于4周小于6周样本,灵敏度100%(12/12),95%CI：0.699-1.000,特异度100%(128/128),95%CI:0.963-1.000,假阳性率0(0,0.301),假阴性0(0,0.036),约登指数为1：3)大于等于6周小于3个月样本,灵敏度99.1%(111/112),95%CI：0.944～1.000,特异度99.5%(801/805),95% CI：0.986～0.998,假阳性0.035,95%CI：0.011-0.092,假阴性0.001,95%CI:0.000-0.008,约登指数为0.986；4)3月龄后样本,灵敏度99.1%(112/113),95% CI:0.945-1.000,特异度99.7%(1205/1209),95% CI:0.991～0.999,假阳性0.034,95% CI:0.011-0.091,假阴性0.001,95% CI：0.000-0.005,约登指数为0.988。结论HIV暴露婴儿在出生后4周内核酸定性检测灵敏度较低,仅为50%,4周龄以后具备极高灵敏度,均在99%以上；在特异度方面,各组特异度分别为100%、100%、99.5%和99.7%,无显著性差异。我国HIV暴露婴儿早期诊断策略的改进具有可行性。第二部分HIV-1 DNA滤纸片干血斑质控品的制备及应用研究背景由于来源于母亲的HIV抗体的存在,血清学检测仅用于排除HIV暴露婴儿感染,不能作为HIV暴露婴儿的确证手段。目前我国HIV暴露婴儿早期诊断的检测方法主要为HIV-1 DNA定性检测,截至目前,我国共建立了7家区域性HIV暴露婴儿感染早期诊断实验室,负责对全国各区域进行HIV暴露婴儿早期诊断,所用检测仪器全部为雅培m2000系统。HIV早期诊断对于确认HIV暴露婴儿感染状态,及早进行抗病毒治疗具有重要意义。因此,对各个实验室进行HIV-1 DNA定性检测能力验证,可以及时发现实验室检测工作中存在的问题,确保实验室检测结果的可靠性,可以提高我国HIV暴露婴儿早期诊断质量控制整体水平和实验室的技术能力。能力验证质控品的制备尤为重要,良好的质控品应具有成分分布均匀,理化性质稳定和容易制备的特点。本文建立并评价了一种利用8E5细胞制备HIV-1 DNA能力验证滤纸片干血斑质控品的方法,为HIV-1 DNA定性检测能力验证工作的开展提供了支持。目的制备用于HIV-1 DNA检测的干血斑能力验证质控品并对其均一性和稳定性进行评估。方法培养仅含单拷贝的缺陷型HIV-1基因的8E5细胞,使用HIV-1阴性全血进行倍比稀释并滴加到滤纸片上制备成含有不同拷贝数8E5细胞的滤纸片干血斑。在不同温度条件下放置不同时间,然后使用雅培R eal-time HIV-1定性检测试剂盒对其进行检测,整理并分析检测结果。评价滤纸片干血斑能力验证质控品均一性和稳定性。结果滤纸片干血斑随机抽样平行检测结果完全一致；-20℃或4℃放置1年,室温放置3个月或在37℃放置4天,检测结果与制备结果一致。在应用性评价中,参加能力验证项目的7家实验室2次检测结果全部正确,制备的滤纸片干血斑作为质控品效果良好。结论使用8E5细胞制备的HIV-1 DNA定性检测能力验证质控品均一性、稳定性良好,是一种可用于目前我国HIV-1 DNA定性检测能力验证的质控品。
【关键词】：HIV 婴儿 干血斑 核酸定性检测 能力验证 质控品 滤纸干血斑 HIV-1 DNA 8E5细胞
【学位授予单位】：中国疾病预防控制中心
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R725.1
【目录】：

• 摘要6-9
• ABSTRACT9-14
• 前言14-24
• 第一部分 HIV暴露婴儿早期诊断策略研究24-31
• 材料与方法24-27
• 结果27-29
• 讨论29-31
• 结论31
• 第二部分 HIV-1 DNA滤纸片干血斑质控品的制备及应用31-54
• 材料与方法32-46
• 结果46-51
• 讨论51-53
• 结论53-54
• 参考文献54-57
• 附录 1 已发表论著57-61
• 附录 2 综述61-69
• 参考文献66-69
• 致谢69-70

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5 ;[J];;年期

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1 范文成;HIV暴露婴儿早期诊断策略研究与HIV-1 DNA滤纸片干血斑质控品的制备及应用[D];中国疾病预防控制中心;2016年

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本文编号：1074309