NAC在氧化应激对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞KGFR磷酸化及泛素化表达影响中的保护作用研究

发布时间：2017-10-24 22:11

  本文关键词：NAC在氧化应激对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞KGFR磷酸化及泛素化表达影响中的保护作用研究

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【摘要】：目的探讨活性氧ROS对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECII)内角质细胞生长因子受体（KGFR）磷酸化及泛素化表达的影响，以及加用抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC）对KGFR保护作用。 方法原代培养胎鼠AECⅡ，待其生长至亚融合状态时，随机分为H_2O_2组，NAC+H_2O_2组和KGF组。流式细胞仪检测H_2O_2组和NAC+H_2O_2两组各时间点时间点ROS水平；Western-Blot检测H_2O_2组各时间点KGFR表达水平；免疫沉淀和western-blot方法检测三组各时间KGFR酪氨酸激酶（RTKs）磷酸化水平和受体泛素化水平。采用SPSS16.0软件进行方差分析及t检验。 结果1.H_2O_2组其他时间点同0min相比，ROS水平显著升高（p0.01）；NAC+H_2O_2组同H_2O_2组相比，ROS水平显著降低（P0.01）；但是同0min相比，5min和40minNAC+H_2O_2组ROS水平仍较高（P0.05），80minNAC+H_2O_2组ROS水平相当（P0.05）。 2.H_2O_2组各时间点KGFR表达水平不变(F检验，p0.05)。 3.与0min（0.9379±0.0589）比较，H_2O_2组5min,10min,20min,40min各时间点产生的ROS激活KGFR酪氨酸激酶，使其磷酸化水平升高，且5min时磷酸化水平最高（1.8796±0.0973，，P=0.000），40min（1.2775±0.0848，P=0.005）后KGFR磷酸化渐消失，80min（0.6519±0.0086）时完全消失。 4.NAC+H_2O_2组各时间点KGFR酪氨酸磷酸化趋势较前一致，但磷酸化水平较H_2O_2组显著减低（P0.05）。 5.H_2O_2组5min,10min,20min,40min各时间点产生的ROS诱导KGFR泛素化，5min时受体泛素化水平最高（2.0225±0.0402，P=0.000），10min（1.3691±0.01386，P=0.006）~40min(1.1642±0.0032，P=0.03)泛素化水平渐降低，但同0min（0.9640±0.0620）相比仍有统计学意义（P0.05）。 6.KGF组激活KGFR，产生受体磷酸化和泛素化表达，同H_2O_2组5min时间点KGFR磷酸化相比，无统计学差异（P0.05）；同H_2O_2组5min时间点泛素化水平相相比，差异显著有统计学意义（P0.05）。 结论氧化应激（ROS）可以激活胎鼠AECIIKGFR酪氨酸激酶，使磷酸化KGFR水平升高，同时诱导KGFR泛素化，但是NAC（N-乙酰-L-半胱氨酸）可以抑制ROS产生，降低KGFR磷酸化表达，从而增强KGF对高氧肺损伤的保护作用。
【关键词】：氧化应激 肺泡Ⅱ型上皮细胞 角化细胞生长因子受体 酪氨酸激酶 N-乙酰-L-半胱氨酸 泛素化
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R725.6
【目录】：

• 缩略词6-7
• 摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 前言11-12
• 材料和方法12-20
• 结果20-28
• 讨论28-31
• 参考文献31-37
• 综述37-55
• 参考文献44-55
• 致谢55

【参考文献】

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1 尉进茜;伊慧珍;;骨髓间充质干细胞对难治性肺疾病治疗的研究进展[J];中国实用医药;2011年24期

本文编号：1090755