静脉注入胆红素对新生大鼠脾p-ERK及IκBα表达的影响

发布时间：2017-10-30 21:31

  本文关键词：静脉注入胆红素对新生大鼠脾p-ERK及IκBα表达的影响

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【摘要】：目的：静脉注入胆红素建立高胆红素血症动物模型，探讨胆红素对脾细胞磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular regulatedproteinkinases，p44/42mitogen activated protein kinases，p44/42MAPK，p-ERK)，NF-κB抑制蛋白α（Inhibitor of nuclear factor kappa-B，NF-kappaB inhibitor，IκBα）表达的影响。方法：1.实验分组：选用7～8日龄清洁级新生SD大鼠，雌雄不限，随机分为空白对照组（Ⅰ）、脂多糖对照组（LPS，Ⅱ）、15mg/kg胆红素对照组（Ⅲ）、15mg/kg胆红素+脂多糖组（Ⅳa）、30mg/kg胆红素+脂多糖组（Ⅳb）和50mg/kg胆红素+脂多糖组（Ⅳc），，共6组，每组24只，每组分成2h、5h、24h三个时间点，每个时间点8只。2.建立新生大鼠高胆红素血症模型：⑴颈静脉注射不同剂量胆红素（15mg/kg、30mg/kg和50mg/kg），空白对照组和脂多糖组经颈静脉注射生理盐水（0.1ml）,缝合颈部切口；⑵在颈静脉给药后1h，空白对照组给予腹腔注射0.05ml灭菌生理盐水，其余各组1h后腹腔注射LPS1mg/kg。⑶分别于腹腔注射LPS后1h、4h、23h颈静脉采血，测血浆胆红素浓度。⑷4%多聚甲醛内固定后快速取脾脏，制作石蜡切片，采用免疫组织化学方法检测脾p-ERK、IκBα蛋白的表达。结果：1.胆红素注入1h后，15mg/kg、30mg/kg和50mg/kg胆红素组达到血浆总胆红素浓度95%的置信区间分别为：（106.31，123.49）μmol/L、（196.58，238.90）μmol/L和（325.15，349.07）μmol/L，且注入剂量和血浆总胆红素浓度有等级相关性（r=0.9452）。2.LPS可促进p-ERK表达和抑制IκBα表达（P＜0.01）。2h时对p-ERK促进作用最强，5h减弱，24h消失；2h时对IκBα抑制作用最强，5h减弱，24h仍然存在。3.低浓度胆红素单独作用可促进p-ERK表达和抑制IκBα表达（P＜0.01）。当胆红素浓度在（106.31，123.49）μmol/L范围时，可促进p-ERK表达，2h促进作用最强，5h减弱，24h消失；低浓度胆红素可抑制脾细胞IκBα表达，2h抑制作用较5h明显（P＜0.01），24h仍存在，该浓度范围的胆红素单独作用对p-ERK、IκBα表达影响均低于LPS的作用（P＜0.01）。4.不同剂量胆红素组在LPS激活后p-ERK的表达情况：胆红素浓度在（106.31，349.07）μmol/L范围时，对LPS激活p-ERK表达均有协同作用；各时段与同时段的LPS组比较，差异有统计学意义（P＜0.01），并随着胆红素浓度升高，协同作用越明显，表达增多，随着时间延长，体内胆红素的代谢，激活作用减弱，24h时作用已消失。5.不同剂量胆红素组在LPS激活后IκBα的表达情况：①在给予LPS激活后，胆红素浓度在（106.31，349.07）μmol/L范围时对LPS抑制IκBα的表达均有协同作用，2h时协同作用最强（P＜0.01）；随着胆红素浓度升高，IκBα表达量减少；随着胆红素代谢，IκBα表达量增加，24h时作用仍存在。6.p-ERK和IκBα与胆红素浓度的直线相关分析结果：⑴在2、5h时p-ERK与胆红素浓度水平呈正相关（r分别为0.9428、0.9945，P＜0.01）。在24h时两者无相关关系存在（r=-0.1809，P＞0.05）。⑵在2、5h时IκBα与胆红素浓度水平呈负相关性（r分别为-0.9391、-0.969， P＜0.01）。在24h时两者无相关关系存在（r=-0.098，P＞0.05）。7.p-ERK和IκBα相关性分析：在2h、5h时p-ERK和IκBα（SUM）值呈负相关（r分别为-0.9763、-0.9687， P＜0.01，在24h时两者无相关关系存在（r=-0.185， P＞0.05）。结论：1.LPS单独作用能够促进p-ERK的表达和抑制IκBα表达；2.低浓度胆红素单独作用能够促进p-ERK表达和抑制IκBα表达；3.低、中、高浓度胆红素对LPS刺激p-ERK表达有协同作用，这种协同作用呈浓度依赖性，随着胆红素浓度的升高，协同作用增强，随着胆红素代谢，刺激作用减弱；4.低、中、高浓度胆红素对LPS抑制IκBα表达有协同作用，这种协同作用呈浓度依赖性，随着胆红素浓度的升高，协同作用越强，随着胆红素代谢，协同作用减弱。提示胆红素影响免疫细胞的机制可能与调节TLR4信号通路中p-ERK的磷酸化和IκBα表达减少有关。
【关键词】：胆红素 高胆红素血症 p-ERK IκBα Toll样受体 大鼠 脾脏 婴儿 新生 脂多糖
【学位授予单位】：泸州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R722.17
【目录】：

• 摘要4-7
• Abstract7-10
• 前言10-12
• 材料与方法12-19
• 结果19-31
• 讨论31-36
• 结论36
• 参考文献36-41
• 英文缩写单词41-42
• 致谢42-43
• 综述 IKBol在NF-KB信号通路中的作用及临床意义43-53
• 参考文献49-53

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本文编号：1119441