早产兔生发基质—脑室内出血后脑组织Caspase-3及VEGF的动态研究

发布时间：2017-11-09 12:12

  本文关键词：早产兔生发基质—脑室内出血后脑组织Caspase-3及VEGF的动态研究

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【摘要】：目的：早产儿生发基质-脑室内出血（germinal matrix hemorrhage-intraventricular hemorrhage，GMH-IVH）及其导致的神经系统后遗症是造成早产儿死亡和儿童神经系统功能障碍的常见疾病，我国早产儿GMH-IVH的发生率明显高于发达国家，发生率为56.6%，其中重度出血发生率为16.3%，，且存活者约35％遗留慢性神经系统功能障碍，如脑瘫、癫痫、学习困难和认知异常等。目前研究显示GMH-IVH后的继发性脑损伤机制十分复杂，涉及炎症反应、氧化应激、小胶质细胞增生等多方面，但众多因素之间有无关联？有无最终共同途径等目前尚无定论。有动物实验研究报道，成年大鼠发生急性创伤性脑损伤时伴有神经细胞凋亡，并且神经细胞凋亡与天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）表达间具有一致性，因此，有学者提出神经细胞凋亡可能是颅脑创伤后继发性脑损伤的最终途径，但是关于新生动物脑损伤后，尤其是新生早产动物方面，是否有Caspase-3参与，类似研究少见。血管内皮生长因子（Vascularendothelial growth factor，VEGF)，其在脑损伤后发挥的促进新生血管生成、抗细胞凋亡、保护缺血脑组织的作用已在成年动物模型中得到广泛验证，但是关于早产动物脑损伤后，尤其是新生的早产动物方面，是否亦有VEGF的参与并发挥脑保护作用，尚无相关报道。本实验旨在通过动态监测早产兔GMH-IVH后脑组织Caspase-3及VEGF的表达及变化情况，探寻两者是否参与早产兔GMH-IVH后的继发性脑损伤，为早产儿GMH-IVH的治疗提供新的思路。 方法： 1.将孕29天孕兔进行剖宫产，迅速取幼兔，并给予保温、奶粉喂养。将所取幼兔随机分为实验组及对照组，每组各取18只早产兔。于生后3小时，实验组的早产兔接受50%丙三醇腹腔注射，剂量为10ml/Kg，对照组的早产兔接受等剂量生理盐水腹腔注射。 2.对照组与实验组早产兔分别于生后24小时接受头颅超声检查，观察GMH-IVH发生情况。选取接受丙三醇腹腔注射后发生GMH-IVH的早产兔15只，编为GMH-IVH模型组。将GMH-IVH模型组和对照组正常早产兔（15只）分别随机分为生后24小时、48小时、72小时三个亚组，按上述时间点给予安乐死，迅速分离脑组织，选取脑室周边区域组织并制成蜡块，用切片机切成5微米厚的切片，供免疫组化和检测凋亡用。 3.免疫组化法检测GMH-IVH模型组与对照组早产兔脑室周边区域组织的Caspase-3和VEGF的表达；TUNEL凋亡检测试剂盒检测上述部位脑组织神经细胞凋亡的情况。免疫组化和TUNEL凋亡检测均使用辣根过氧化物酶标记链霉卵白素工作液显色，以胞浆呈棕黄色颗粒为阳性结果。 4.免疫组化和凋亡细胞测定实验中平均阳性细胞表达率的计算：高倍镜下计数，采用imagepro-plus6.0图像分析系统分别测出对照组与GMH-IVH模型组早产兔生后24h、48h、72h3个时间段每张切片阳性细胞表达率（%），每张切片取5个高倍视野，取平均值。 5.统计方法：采用SPSS13.0统计学软件、Microsoft Excel2003进行统计学处理，实验数据资料为计数资料，率的比较采用卡方检验，两两间比较采用2×2表卡方检验。检验水准定为0.05，P值小于0.05有统计学意义，P 0.01时具有显著差异。 结果： 1.成功地对母孕兔实施了剖腹产并建立了早产兔GMH-IVH模型。 2.脑组织Caspase-3阳性细胞的表达 GMH-IVH早产兔脑组织标本中Caspase-3平均阳性细胞表达率在生后24h、48h以及72h均高于对照组，差异有显著性（P0.01）；GMH-IVH早产兔脑组织标本中Caspase-3平均阳性细胞表达率在生后24h、48h、72h三个时间点间两两比较亦有显著差异，以生后48h平均阳性细胞表达率最高，其次是生后24h，最后是生后72h (P0.01)，而对照组脑组织标本中Caspase-3平均阳性细胞表达率在生后24h、48h、72h三个时间点间两两比较，无显著差异(P0.05)。 3.脑组织VEGF阳性细胞的表达 GMH-IVH早产兔脑组织标本中VEGF平均阳性细胞表达率在生后24h、48h以及72h均高于对照组，差异有统计学意义（P0.01-0.05）；GMH-IVH早产兔脑组织标本中VEGF平均阳性细胞表达率在生后24h、48h、72h三个时间点间两两比较差异有统计学意义，以生后24h平均阳性细胞表达率最高，其次是生后48h，最后是生后72h (P0.01-0.05)，而对照组脑组织标本中VEGF平均阳性细胞表达率在生后24h、48h、72h三个时间点间两两比较，无显著差异(P0.05)。 4.脑组织凋亡细胞的表达 GMH-IVH早产兔脑组织凋亡细胞的表达率在生后24h和48h高于对照组，差异有显著性（P0.01），但生后72h的凋亡细胞的表达率与对照组无显著差异（P0.05）；GMH-IVH早产兔脑组织凋亡细胞的表达率在生后24h和72h无显著差异（P0.05），但在生后48h的表达率分别高于24h和72h，差异有显著性（P0.01），对照组脑组织凋亡细胞的表达率在生后24h、48h、72h三个时间点间两两比较，无显著差异(P0.05)。 结论： 1.早产兔GMH-IVH后，脑组织凋亡细胞的数目较正常早产兔明显增多，并且GMH-IVH早产兔脑组织Caspase-3的表达趋势与其凋亡细胞的表达趋势一致，提示Caspase-3参与了早产兔GMH-IVH后继发性脑损伤； 2.早产兔GMH-IVH后，脑组织VEGF的表达水平较正常早产兔明显升高，提示VEGF参与了早产兔GMH-IVH后继发性脑损伤的过程，且可能发挥了脑保护作用。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R722.6

【参考文献】

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本文编号：1161816