维生素D受体在病毒性心肌炎小鼠心肌中的表达

发布时间：2017-11-25 11:03

  本文关键词：维生素D受体在病毒性心肌炎小鼠心肌中的表达

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【摘要】：目的通过建立病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)动物模型,动态监测维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)在VMC小鼠心肌中的表达水平。进一步观察VDR在VMC小鼠心肌中的表达与小鼠心肌炎性病理改变的相关性。探讨VDR参与小鼠VMC免疫炎性机制的可能作用。方法将人喉癌上皮细胞Hep-2细胞复苏传代,用柯萨奇B3病毒(coxsackievirus B3,CV B3)感染该细胞,扩增病毒,增加病毒毒力,当达到一定毒力后,测定CVB3的半数组织感染剂量(50%tissue culture infective dose,TCID50),收集病毒备用。选取120只4周龄雄性BALB/c无特定病原体级(SPF)小鼠,随机分为两组,实验组80只,对照组40只。其中实验组80只小鼠腹腔注射适量CVB3制备VMC模型,对照组40只小鼠则腹腔注射等量的DMEM细胞培养液。密切观察小鼠生长情况,分别在腹腔注射后第3d、7d、14d和28d,实验组各处死15只小鼠,对照组则各处死10只小鼠,取得小鼠的心脏标本。用免疫组织化学技术(immunohistochemitry,IHC)检测实验组小鼠心肌组织的VDR的动态表达情况,并与相应时间点对照组小鼠VDR表达情况对比分析;用HE染色观察小鼠心肌的病理变化,进行心肌病理评分。探讨分析VMC小鼠心肌VDR的表达与心肌病理变化之间的相关性。结果(1)Balb/c雄性小鼠经腹腔注射CVB3成功制备VMC小鼠模型。实验组小鼠在注射病毒3d后,活动量、饮食量开始减小,出现掉毛现象;注射病毒第7d左右,小鼠精神萎靡,毛发稀疏,体格消瘦,小鼠共死亡19只,为死亡高峰期,统计死亡率为23.75%。对照组小鼠则精神、饮食和活动情况良好,无明显掉毛现象,没有出现死亡。在小鼠处死取出心脏标本后,CMV实验组小鼠心脏外膜可见到明显坏死病灶,呈现不规则图形的白斑。而对照组小鼠心脏未见坏死的白斑。(2)经HE染色,对小鼠心肌组织进行组织病理学观察。在病毒接种后第3d,小鼠心肌细胞开始出现少量炎症细胞侵润;在第7d时,小鼠心肌组织炎症坏死达到高峰,可见心肌溶解,出现了大片的坏死病灶;在病毒接种后第14d,心肌局部炎症、坏死病灶可见吸收。第28d时,小鼠心肌大部分坏死病灶已吸收。对照组小鼠心肌排列整齐,无炎症浸润。(3)接种病毒的实验组小鼠心肌组织,经IHC染色后,可观察到VDR表达显著升高。并在病毒注射第7d时,VDR表达水平达到高峰,染色加强,随后逐渐下降,但在第28d时仍处于较高水平。在第3d、7d、14d和28d,实验组小鼠VDR表达水平分别为:2.39±0.23、5.45±0.30、4.19±0.26、2.52±0.28。对照组小鼠在第3d、7d、14d和28d,VDR表达水平则分别为:1.64±0.23、1.66±0.19、1.68±0.29、1.64±0.36。各时间点实验组小鼠VDR表达水平均高于对照组,差异均有显著统计学意义(P0.01)。(4)对实验组小鼠心肌VDR表达水平与其心肌病理变化进行相关性分析,其结果为:第3d,r=0.927,P0.01;第7d,r=0.894,P0.01;第14 d,r=0.820,P0.01;第28 d,r=0.859,P0.01;结果均提示小鼠心肌VDR的表达量与病理积分呈正相关。结论VDR可能通过免疫调节,参与了VMC发病的炎性免疫过程。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R725.4

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本文编号：1225768