WISP1蛋白在病毒性心肌炎中的作用及葛根素的干预作用研究

发布时间：2017-12-20 10:15

  本文关键词：WISP1蛋白在病毒性心肌炎中的作用及葛根素的干预作用研究　出处：《吉林大学》2013年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：研究背景：病毒性心肌炎（VMC）是儿科常见的心血管系统疾病，其临床表现轻重不等，预后差异显著，目前无特异性治疗。VMC的发病机制尚未完全明确，其导致的心肌纤维化（MF）严重程度与疾病预后密切相关。WISP1是Wnt诱导分泌蛋白1，有研究发现它有促进心肌细胞肥大、心肌成纤维细胞增值及胶原合成的作用，与MF密切相关，，可被致炎因子TNF-α介导经由TNF-α/WISP1信号转导途径完成。葛根素为葛根中提取的一种异黄酮类化合物，具有保护缺血心肌、改善心肌代谢，抗氧化、抗凋亡、抗心肌纤维化等重要的药理作用。 研究目的：通过建立VMC小鼠模型，观察WISP1在VMC小鼠心肌上的表达情况，探讨WISP1在VMC发病机制中的作用，同时观察葛根素对VMC的干预作用。 研究方法：实验选取体重14~15g的雄性Balb/c小鼠120只，随机分为对照组（n=30）、VMC组（n=45）和治疗组（n=45）。VMC组和治疗组小鼠腹腔注射CVB3悬液0.2ml建立VMC模型，治疗组从接种病毒日起每日注射葛根素注射液（15mg/kg.d），连续28天。每日记录小鼠日常情况及死亡状况。分别于第4、7、14、28天每组随机抽取6只小鼠称重、摘眼球取血后断颈处死，血清测定肌酸激酶同工酶（CK-MB）；解剖小鼠，心脏称重后中性甲醛液固定，HE染色后光镜下观察心肌组织形态学改变，半定量计算病理积分；Masson染色观察胶原纤维变化，计算心肌胶原容积分数（CVF）；免疫组织化学法对WISP1及TNF-α的表达进行定性、半定量测定；使用SPSS17.0统计软件进行统计分析。 研究结果：（1）小鼠感染CVB3后，VMC组与对照组、治疗组相比，小鼠一般状态及生存质量差，体重轻，死亡率高；心肌酶CK-MB峰值高，下降速度慢；HE染色提示心肌病变程度重，病理积分高，差异均有统计学意义；Masson染色提示VMC组小鼠心肌纤维第7天即开始增加，胶原面积明显增加、染色加深，胶原容积分数（CVF）增高，与治疗组有显著性差异；免疫组织化学法显示VMC组小鼠心肌WISP1及TNF-α表达水平明显增加，与治疗组有显著性差异；以上均提示葛根素注射液对VMC干预作用明确，有可能在保护心肌、改善炎症、抗纤维化方面起到重要作用，其抗纤维化作用可能与下调WISP1的表达有关。（2）免疫组织化学法结果显示：正常小鼠心肌WISP1及TNF-α仅有少量表达，VMC组小鼠表达明显增加，提示WISP1确实参与了VMC的发病过程。VMC组小鼠心肌WISP1及TNF-α第4天即出现明显表达，随着时间推移，WISP1表达量逐渐增加，于28天达到高峰；而TNF-α于第7天达到高峰，14天略有下降，28天降到最低。WISP1及TNF-α在炎症坏死病灶周围及纤维化处表达均增强，且WISP1的表达时间比胶原纤维增加时间早，推测可能是由于炎症因子TNF-α通过刺激成纤维细胞介导了WISP1的异常表达。（3）直线相关分析示：WISP1与CVF明显正相关，与CK-MB、心肌病理积分无相关性，提示WISP1与心肌纤维化关系密切，由此参与了VMC的发病过程。TNF-α与CK-MB、心肌病理积分明显正相关，与CVF无相关性，进一步表明炎症了TNF-α为VMC的致炎因子，并非心肌纤维化的标志因子。直线相关分析示WISP1与TNF-α无明显相关性，与推测相悖，可能是由于TNF-α即是敏感的炎症因子，又与纤维化有关，在免疫反应中又起到重要作用，与其多重作用相关，但不能否定其介导了WISP1的表达，需要更多研究进一步明确。 实验结论：1.WISP1参与了VMC的发生发展过程。2.WISP1与VMC的心肌纤维化程度密切相关，该过程可能是通过TNF-α表达上调介导。3.葛根素能提高VMC小鼠的存活率，保护心肌，改善心肌炎症，可能与其抗细胞凋亡、抗氧化、清除氧自由基有关。4.葛根素能减轻VMC心肌纤维化程度，可能是通过抑制TNF-α的表达下调WISP1实现的。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R725.4

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本文编号：1311717