无镁诱导神经元惊厥样放电后Lingo-1对轴突的影响

发布时间：2017-12-30 07:09

  本文关键词：无镁诱导神经元惊厥样放电后Lingo-1对轴突的影响　出处：《重庆医科大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：第一部分:无镁诱导神经元惊厥样放电后对神经元轴突及Lingo-1表达的影响目的:研究无镁诱导神经元放电后,神经元轴突的形态变化及Lingo-1的表达情况。方法:以培养10d的皮层神经元为研究对象,根据是否经正常细胞外液或无镁细胞外液处理3h,分为正常组和无镁组。应用膜片钳全细胞模式记录两组神经元动作电位发放情况;免疫荧光技术标记神经元特异性神经丝蛋白200(Neurofilament protein,NF200)检测培养神经元的纯度及两组神经元轴突变化;以上两种不同处理后6h、12h、24h、48h及72h五个时间点提取RNA及全蛋白,采用Q-PCR及Western-blot检测两组相应时间点神经元中Lingo-1表达情况。结果:(1)无镁组神经元放电形式是强直性放电,动作电位发放频率明显高于正常组(P0.05)。(2)正常组神经元轴突粗壮、轴突间网络连接较致密,NF200只在突起表达;无镁组神经元轴突纤细、轴突间网络连接稀疏,NF200在胞体内高表达。(3)各观察时间点上,无镁组Lingo-1的表达量均高于正常组(P0.05)。结论:无镁处理后可成功建立惊厥样细胞模型,无镁处理后有神经元轴突损伤及Lingo-1表达升高。第二部分:无镁诱导神经元惊厥样放电后Lingo-1表达升高与轴突损伤的关系目的:研究惊厥样神经元放电后Lingo-1表达升高与轴突损伤的关系。方法:(1)设计sh RNA慢病毒抑制神经元Lingo-1表达,并以不针对任何基因的sh RNA序列作为对照,分为正常组、对照sh RNA组和Lingo-1 sh RNA组,采用Western-blot检测三组Lingo-1表达量。(2)设计sh RNA慢病毒抑制Lingo-1表达,并以不针对任何基因的sh RNA序列作为对照,分为正常组、无镁组、无镁+对照sh RNA组、无镁+Lingo-1 sh RNA组4组,用免疫荧光技术检测神经元轴突长度。结果:(1)神经元中Lingo-1表达量:正常组与对照sh RNA组无统计学差异,Lingo-1 sh RNA组明显低于对照sh RNA组。(2)轴突长度:无镁组小于正常组(P=0.000),无镁+对照sh RNA组与无镁组无统计学差异,无镁+Lingo-1 sh RNA组大于无镁+对照sh RNA组(P=0.000)。结论:慢病毒介导的Lingo-1 sh RNA可成功抑制Lingo-1的表达,降低Lingo-1表达后神经元轴突损伤减轻,说明Lingo-1可能参与神经元放电后神经元轴突损伤。
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【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R720.597

【参考文献】

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1 张永杰;左国平;唐敏峰;顾振;;抗LINGO-1抗体可促进小鼠脊髓损伤后运动纤维再生及抑制感觉纤维萎缩[J];南京医科大学学报(自然科学版);2012年12期

2 蒋莉,蔡方成,李欣,张晓萍;惊厥持续状态中大鼠脑内神经元死亡的年龄特征[J];中华儿科杂志;2002年09期

3 曹海燕,姜玉武,吴希如;无镁诱导培养的大鼠皮层神经元癫痫样放电[J];北京大学学报(医学版);2002年03期

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本文编号：1353846