应用血小板蛋白质组学方法筛选ITP患儿血小板蛋白标志物

发布时间：2018-03-26 22:07

  本文选题：免疫性血小板减少症　切入点：表面增强激光解吸/离子化飞行时闻质谱　出处：《泸州医学院》2012年硕士论文

【摘要】：研究背景与目的：免疫性血小板减少症(ITP)是一种免疫介导的血小板减少综合征,是儿童最为常见的出血性疾病。迄今,ITP的发病机制尚未完全明了,ITP时血小板功能究竟如何、血小板是否处于激活状态等,目前并无定论。目前对ITP的诊断依然是“排除诊断法”,临床上诊断主要靠外周血小板减少但其无特异性；抗血小板自身抗体(PAIgG)的检测对于ITP的诊断有限,尽管对其检测的敏感性和特异性有所提高,但仍然无法将“原发免疫性血小板减少症”与“继发性免疫性血小板减少症”区分开来。因此,以血小板为基础,研究血小板表达的特殊蛋白质,分析其功能变化在ITP发病中的作用,对阐明ITP的发病机制具有重要意义。表而增强激光解吸电离飞行时间质谱(surface enhanced laser desorption/ionization-time of flight-mass spectrometry, SELDI-TOF-MS)技术是近年发展起来的一种蛋白组学研究方法。它可对血清、细胞裂解液等生物样品直接进行检测,能基本反映被检样本中蛋白质的全貌,进而可以发现蛋白质的变化,为早期诊断、预后估计、复发或转移的监测提供了可能。本研究旨在利用Ciphergen公司的蛋白质芯片飞行于时间质谱仪系统结合蛋白芯片对ITP, ITP治疗组及正常患儿血小板差异表达蛋白进行分析,筛选与ITP相关的血小板蛋白质标志物,在血小板蛋白质组水平探讨ITP的发病机制。探讨建立可用于ITP早期诊断的分类模型。方法：采用SELDI (surface enhanced laser desorption/ionization, SELDI)蛋白芯片技术,检测40例ITP患儿、40例ITP治疗组患儿及35例正常儿童血小板进而获得血小板蛋白质图谱图,将获得的蛋白质谱图用Ciphergen公司的Biomarker Wizard和Biomarker Pattern软件分析,通过交叉验证建立起ITP早期诊断的分类树模型,,并另将含有40例ITP患儿和35例正常儿童的验证组共75例对此模型进行盲法验证。蛋白质组数据库查询差异蛋白,筛选与ITP相关的血小板蛋白质。结果：1,在分子质量／电荷比值(质荷比,mass electron ratio, M/Z)为2000—20000范围内,对40例ITP患儿及35例正常儿童血小板蛋白进行分析结果发现共有22个蛋白表达量存在统计学差异(P0.01),1个蛋白峰表达上调,21个蛋白峰表达下调,筛选出的22个差异蛋白质峰经蛋白数据库的初步鉴定,这些蛋白可能与血小板蛋白质的生成与翻译,信号转导,转录的调控,免疫调控,免疫应答,抗凝及细胞之间的调节等有关。它们分别为磷酯酰丝氨酸脱羧酶α链,50S核糖体L34,内分泌蛋白质VGF,假定未知编码蛋白M1R22HG, Humanin-like蛋白质5,β-防卫素110,乳粘素,尿激酶I型纤溶酶原激活物,P3(42),人C13orf3(SKA3),紧密连接关联蛋白1,信号转导蛋白CD24,核膜孔蛋白-62C末端样蛋白。另外亦有9个蛋白质峰在数据库中鉴定结果为unnamed。2,在筛选出的22个差异蛋白峰中,以质荷比为5170.65、7672.06m/z、3553.70m/z、2281.72m/z的蛋白质峰差异最明显,以此建立的分类树诊断模型,其准确率、灵敏度及特异度为96%(72/75)、100%(40/40)和92.5%(32/35)。将包括ITP患儿40例和35例正常儿童的验证组对此模型进行盲法验证,结果该模型诊断ITP的准确率、灵敏度及特异度分别是95%(71/75)、96%(38/40)和94%(33/35)。3,ITP时,21个差异蛋白为低表达,而在ITP治疗后血小板数目恢复正常时,这些低表达的蛋白均表达上调,但与正常对照组相比,22个差异蛋白中除β一防卫素110外,余蛋白质仍为低表达。结论：应用SELDI技术可以筛选出与ITP相关的敏感性高、特异性强的血小板蛋白标志物,建立的决策树分类模型可能对ITP患儿的诊断具有重要的临床价值。
[Abstract]:鐮旂┒鑳屾櫙涓庣洰鐨勶細鍏嶇柅鎬ц��灏忔澘鍑忓皯鐥，

本文编号：1669790