泛素蛋白酶体途径对高氧暴露下内质网应激诱导的AECⅡ凋亡的影响

发布时间：2018-04-01 12:11

  本文选题：泛素蛋白酶体途径　切入点：内质网应激　出处：《江苏大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的建立早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(Alveolar type Ⅱ Epithelial Cell,AECerⅡ)原代培养高氧细胞损伤模型,研究泛素蛋白酶体途径(Ubiquitin Proteasome Pathway,UPP)对高氧暴露下内质网应激(Endoplasmic Reticulum Stress,ERS)诱导AECerⅡ凋亡的影响。方法早产大鼠AECerⅡ原代培养,随机分为空气组和高氧组,分别用空气和950mL/L O2进行干预,其中部分高氧组利用蛋白酶体抑制剂MG132进行干预,以DMSO作为对照。空气或高氧暴露24、48和72 h后,于倒置相差显微镜下观察细胞形态变化;采用异硫氰酸荧光素标记的膜联素V/碘化丙啶(annexin V-FITC/PI)双染法结合流式细胞术检测细胞凋亡;特异性荧光底物检测20s蛋白酶体活性,实时荧光定量PCR(Real-Time PCR,RT-PCR)检测GRP78、CHOP和泛素(Ubiquitin,Ub)mRNA表达;Western blot法检测细胞内GRP78、CHOP、总泛素化蛋白及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达;免疫荧光染色后荧光显微镜下观察Caspase-3的表达。结果(1)空气或高氧暴露24、48和72h后,与同时间点空气组相比,高氧组AECerⅡ细胞数量减少,细胞形态不规则且出现空泡样改变;细胞凋亡检测显示高氧组AECerⅡ凋亡增加,差异具有统计学意义(P均0.05);高氧组AECerⅡ中20s蛋白酶体活性降低,而GRP78、CHOP和Ub mRNA的表达增加,同时AECerⅡ中GRP78、CHOP和Caspase-3蛋白表达增加,Bax/Bcl-2比值上升,总泛素化蛋白表达增加,差异均具有统计学意义(P均0.05);(2)与高氧+DMSO组相比,高氧+MG132组AECerⅡ凋亡增加,差异具有统计学意义(P0.05);高氧+MG132组AECerⅡ总泛素化蛋白、GRP78、ATF4、CHOP和Caspase-3蛋白表达明显上调,Bax/Bcl-2比值上调,差异均具有统计学意义(P均0.05);荧光显微镜下高氧+MG132组AECerⅡ中FITC标记的Caspase-3绿色荧光增多。结论(1)高氧暴露引起AECerⅡ发生ERS,使20s蛋白酶体活性降低,泛素化蛋白降解减少,诱导AECerⅡ凋亡。(2)利用MG132抑制蛋白酶体活性,可增强高氧暴露下ERS诱导的AECerⅡ凋亡。
[Abstract]:Objective to establish the injury model of alveolar type 鈪，

本文编号：1695512