不同时机应用促红细胞生成素对感染所致新生大鼠脑损伤的保护作用

发布时间：2018-04-10 22:33

本文选题：促红细胞生成素 + 脂多糖　；参考：《郑州大学》2014年硕士论文

【摘要】：背景和目的围生期感染是导致早产及早产儿脑损伤的一个重要原因，脑白质损伤（White matter injury，WMI）是早产儿脑损伤中最常见、最严重的类型之一，严重影响早产儿的生命健康和生存质量。有研究表明，出生后感染是早产儿神经发育不良结局的重要危险因素之一。目前许多研究已应用细菌脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）建立了感染所导致的新生儿脑损伤动物模型，最常见的为宫内感染及生后感染所致新生儿脑损伤模型；现有报道中LPS常见应用途径包括腹腔注射、静脉注射或脑内注射等。目前关于早产儿脑损伤尚缺乏有效防治手段，其中促红细胞生成素（erythropoietin,EPO）作为中枢神经系统一个新的神经营养及保护因子，许多动物实验及临床试验已证实外源性EPO能够透过血脑屏障进入到脑组织，对新生儿脑损伤有保护作用，显示较好的应用前景。目前对EPO用于感染所致早产儿脑损伤保护作用的最佳方案（应用时机、剂量、给药间隔等）尚不明确，本实验采用腹腔注射LPS制备生后感染诱导的新生大鼠脑损伤模型，旨在探讨EPO对生后感染所致早产儿脑白质损伤保护作用的最佳应用时机及其相关机制，为临床应用EPO防治脑损伤提供理论依据。材料与方法将130只P2新生SD大鼠，，随机分为对照组（A组）50只、LPS感染组（B组）50只、早期EPO干预组（C组）20只、晚期EPO干预组（D组）10只。A、B、C组新生大鼠连续5天（P2-P6）分别腹腔注射相应药物：等容积的生理盐水+等容积的EPO空白对照品、0.6mg/kg LPS+等容积的EPO空白对照品、0.6mg/kg LPS+5000IU/kg EPO；D组新生大鼠连续5天（P2-P6）腹腔注射0.6mg/kg LPS，最后一次注射后24h开始连续腹腔注射5天（即P7-P11）5000IU/kg EPO。 A、B两组分别于P2（腹腔注射第一次药物后6h）、P7、P12，各随机抽取10只新生大鼠取脑以矢状缝为标志分为左右半脑，右侧脑-80℃冷存，用于ELISA方法检测脑组织EPOR蛋白水平；左侧脑组织存于液氮中用于RT-PCR方法检测EPOR mRNA水平；A、B、C三组于P7随机选取10只新生大鼠灌注取脑，余10只续养，四组均于D组最后一次用药后24h（P12）灌注取脑，应用免疫组织化学方法检测脑组织MBP、GFAP、EPOR表达，采用HE染色观察各组大鼠脑组织病理改变。结果 1.不同组别新生大鼠脑组织病理改变对照组新生大鼠脑组织海马锥体细胞排列整齐、层次清晰；LPS感染组细胞界限不清、层次紊乱，细胞数目减少；EPO干预组较LPS感染组细胞层次清晰，早期干预组效果更明显。对照组侧脑室无扩张，脑室周围白质结构清楚，灰白质界限明显，周围神经元排列整齐；LPS感染组脑室周围白质有囊性软化区域形成，且有脑室扩张情况；EPO干预组均未见明显软化灶，脑室扩张情况较LPS感染组减轻，早期EPO干预组较晚期干预组更明显。 2.各组新生大鼠脑组织MBP的表达 LPS感染组较对照组MBP表达明显减少，差异有统计学意义（P0.05）；早期EPO干预组与晚期EPO干预组MBP表达较LPS感染组表达增多，差异均有统计学意义（P0.05）；早期EPO干预组较晚期EPO干预组MBP表达增多，差异有统计学意义（P0.05）。 3.各组新生大鼠脑组织GFAP的表达 7日龄LPS感染组较对照组GFAP表达明显增多，差异有统计学意义（P0.05）；EPO干预组GFAP表达与LPS感染组差异无统计学意义（P0.05）。12日龄LPS感染组较对照组GFAP表达明显增多，差异有统计学意义（P0.05）；早期EPO干预组与晚期EPO干预组GFAP表达较感染组表达减少，差异有统计学意义（P0.05）；早期EPO干预组较晚期EPO干预组GFAP表达减少，但差异无统计学意义（P0.05）。 4.LPS对新生大鼠脑组织EPOR及EPOR mRNA表达的影响免疫组化显示：P7时感染组EPOR表达较对照组明显增多，两组平均积分光密度值（IOD值）差异有统计学意义（P0.05）；P12时感染组较对照组表达仍增多，两组差异无统计学意义（P0.05）。ELISA方法测定EPOR蛋白水平表达及RT-PCR检测EPOR mRNA表达发现：（1）感染组较对照组EPOR与EPORmRNA表达增加，其中P2与P7时，感染组与对照组差异有统计学意义（P0.05），P12时两组差异无统计学意义（P0.05）。（2）随日龄增加EPOR与EPOR mRNA表达呈下降趋势，感染组与对照组均为P2时表达高于P7、P12，差异有统计学意义（P0.05），P7时表达高于P12，差异无统计学意义（P0.05）。结论 1. EPO可减轻生后感染所致新生大鼠脑损伤的病理改变、促进脑白质髓鞘发育及减轻星形胶质细胞的过度增生，有一定的脑保护作用，早期应用优于晚期应用。 2.感染可使新生大鼠脑组织EPOR表达上调；EPOR表达随日龄增加呈下降趋势。
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【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R722.1

【参考文献】