表没食子儿茶素没食子酸酯对3T3-L1细胞增殖、分化及血管生成的影响

发布时间：2018-04-24 19:22

本文选题：表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG) + 3T3-L1细胞　；参考：《上海交通大学》2014年硕士论文

【摘要】：背景:肥胖是一种复杂的多因素的慢性疾病,是糖尿病、高血压、肿瘤和心血管疾病的危险因素,肥胖及其相关慢性病的防治是营养与健康研究与实践工作的重点。肥胖的发展是以脂肪细胞数量增加和细胞体积肥大所导致的脂肪积聚为特征。目前认为,脂肪组织的增生需要建立新生血管提供足够的氧气和营养,阻断脂肪组织的血管生成可能是一个抑制脂肪生成的新途径。脂肪组织是人体内最大的内分泌组织之一,可产生多种脂肪因子调节其自身及机体代谢,其中,它所分泌的血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)被认为是促进脂肪组织血管新生最重要的调节因子。最新研究证据表明,调节血管生成的药物能通过调节脂肪组织脉管系统的生长和重构来影响脂肪的扩张和代谢。因此,针对脂肪组织的血管生成调节剂为肥胖症的治疗提供了一种新的治疗选择。表没食子儿茶素没食子酸酯((-)-Epigallocatechin-3-gallate,EGCG)是绿茶中最丰富且最具有活性的成分,已有研究证实其对肥胖有防治作用。几项肿瘤新生血管抑制实验表明,EGCG具有抑制肿瘤新生血管形成的作用。那么,EGCG是否具有抑制脂肪组织血管生成的潜力?目前尚无研究报道。我们假设EGCG可以通过抑制脂肪组织血管新生途径调节脂肪组织生成及其功能。本课题在培养的脂肪细胞水平拟对上述假设进行验证。目的:1.通过观察EGCG对3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响,了解EGCG对脂肪组织生成的影响;2.通过观察EGCG在3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化过程对VEGF表达的影响,以及脂肪细胞分泌的VEGF对人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cell,HUVEC)增殖及小管形成的影响,了解EGCG对血管生成的作用;3.通过观察EGCG对脂肪细胞转录因子PPARγ、C/EBPα对VEGF表达的作用,初步探索EGCG调控脂肪组织血管生成的分子机制。方法:1.采用x CELLigence实时细胞分析系统观察不同浓度的EGCG对3T3-L1前脂肪细胞和脂肪细胞增殖的影响;2.采用油红O染色法检测不同浓度的EGCG对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响;3.采用ELISA法检测不同浓度的EGCG处理的3T3-L1前脂肪细胞和脂肪细胞细胞培养上清液中VEGF的含量;采用免疫荧光技术检测不同浓度的EGCG对3T3-L1前脂肪细胞和脂肪细胞VEGF表达的影响;采用实时荧光定量PCR技术检测不同浓度的EGCG对3T3-L1前脂肪细胞和脂肪细胞VEGF表达的影响;4.采用蛋白免疫印迹反应(Western Blotting)法和实时荧光定量PCR技术检测不同浓度的EGCG对3T3-L1脂肪细胞PPARγ、C/EBPα的蛋白表达水平和m RNA水平的影响;5.建立3T3-L1细胞和HUVEC的共培养体系,采用x CELLigence实时细胞分析系统观察3T3-L1前脂肪细胞和脂肪细胞对HUVEC增殖的影响;收集采用EGCG和未采用EGCG处理的3T3-L1脂肪细胞的细胞培养上清液,用于培养接种于Matrigel胶上的HUVEC,观察其对HUVEC小管生成的影响。结果:1.与对照组相比,0.5μg/ml~50μg/ml EGCG刺激均对3T3-L1前脂肪细胞的增殖显著的抑制作用(P0.05),且该作用呈现一定的剂量依赖关系。2.虽然≤10μg/ml的EGCG刺激对3T3-L1前脂肪细胞的分化没有明显的影响,但是高达25μg/ml的EGCG刺激能抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化(P0.05)。3.5μg/ml~50μg/ml EGCG刺激能抑制3T3-L1前脂肪细胞和脂肪细胞的细胞上清液中VEGF分泌。免疫荧光实验结果显示,VEGF在3T3-L1脂肪细胞中的表达比与3T3-L1前脂肪细胞更多。实时荧光定量PCR结果显示,EGCG能显著降低3T3-L1前脂肪细胞和脂肪细胞中VEGF的表达。4.Western Blotting和实时荧光定量PCR结果显示,EGCG能显著降低3T3-L1脂肪细胞PPARγ、C/EBPα的蛋白表达和m RNA表达。5.3T3-L1细胞能刺激HUVEC的增殖,25μg/ml的EGCG处理的3T3-L1脂肪细胞的细胞上清液能够抑制HUVEC小管生成。结论:首先,EGCG具有抑制前脂肪细胞和脂肪细胞的增殖,减少前脂肪细胞的分化,并降低脂质在脂肪细胞中积累的能力。其次,在细胞水平,我们发现EGCG具有抑制脂肪组织的血管生成的作用。
[Abstract]:Background : Obesity is a complicated multi - factor chronic disease , it is the risk factor of diabetes , hypertension , tumor and cardiovascular disease , obesity and its associated chronic diseases control is the focus of nutrition and health research and practice . The expression of VEGF in 3T3 - L1 preadipocytes and 3T3 - L1 preadipocytes were inhibited significantly . The results showed that the expression of VEGF in 3T3 - L1 preadipocytes was significantly reduced compared with that of 3T3 - L1 preadipocytes ( P0.05 ) .

【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R589.2

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