神经管畸形模型的建立及RARα和Hoxd4基因表达的研究

发布时间：2018-05-25 09:01

  本文选题：维甲酸 + 神经管畸形　； 参考：《中南大学》2012年硕士论文

【摘要】：目的： 通过孕期一次性投入大剂量维生素A类物——全反式维甲酸,建立SD大鼠胎鼠的神经管畸形模型,观察E20天实验组及对照组胎鼠发生先天畸形的种类,几率,记录其身长、体重进行比较,并进行病理组织切片,比较观察其组织结构的改变和缺损,说明全反式维甲酸对胚胎发育的限制性和毒性作用以及其致畸性；取实验组及对照组E12, E13, E14, E15, E16天胚胎的神经管,检测RARamRNA及Hoxd4mRNA的表达,了解神经管畸形形成过程中RARa及Hoxd4的异常表达,探讨神经管畸形发生的可能机制,为神经管畸形的预防提供一定的理论依据。 方法： 1.胎鼠神经管畸形模型的建立：正常怀孕的SD大鼠随机分为两组：实验组于大鼠孕10天时,一次性给予浓度为20mg/ml,剂量为120mg/kg的atRA,所用溶剂为食用橄榄油；对照组于大鼠孕10天时给予同样体积的橄榄油。于孕20天剖宫取胎,观察胚胎的先天畸形情况,记录其身长、体重及数量。 2.病理切片：取实验组有明显脊柱裂的胎鼠的腰骶部及其以下组织及对照组正常胎鼠的腰骶部及其以下组织,常规石蜡包埋、HE染色。观察其病理形态的变化。 3. RARα及Hoxd4mRNA的检测：取实验组及对照组12,13,14,15,16天胚胎的神经管组织,利用RT-PCR测定RARamRNA及Hoxd4mRNA的表达,了解其在胚胎发育过程中的表达。 结果： 1.神经管畸形动物模型及其伴发畸形：E20天实验组10只孕鼠胎鼠接受统计,胚胎总数109只,其中死胎5只(4.59%),吸收胎6只(5.50%),神经管畸形胎鼠65只(66.33%),类型均为脊柱裂,未发现脑膨出、无脑儿等其他类型的神经管畸形,有神经管畸形的胎鼠均伴有无尾无肛门畸形。对照组10只孕鼠,共获得胎鼠125只,无死胎及吸收胎,胎鼠外观均未出现上诉畸形。实验组与对照组在妊娠第20天时身长及体重各数据经t检验分析,差异有统计学意义(P0.001)。实验组均较对照组发育差,身长、体重均低于对照组。切片形态学观察：对照组骶、尾椎发育良好,脊髓形态正常,灰白质分布清楚,灰质呈蝶形分布,被覆皮肤连续；实验组胚胎中则可见腰骶部脊柱裂,脊髓脊膜膨出、脊髓形态改变,灰白质分布紊乱,灰质蝶形区消失,多见炎症细胞侵润,被覆皮肤不连续。 2.维甲酸诱导大鼠神经管畸形胚胎中RARamNR及Hoxd4mNRA表达的研究：对照组RARamRNA在E12天开始测得表达,到E14天时处于表达高峰,E15天开始下降,E16天时降至E13天水平；实验组中RARamRNA在E12天时就处于表达高峰,之后表达量逐渐下降,E12,E13,E14天表达量均高于对照组同一时段表达量(P=0.0000.05),E15天表达量稍低于对照组同一时段表达水平(P=0.0010.05),至E16天时表达量降至对照组E16天水平(P=0.3110.05)。对照组Hoxd4mRNA在E12天开始测得表达,之后表达量逐渐增高,到E15天时处于表达高峰,之后表达下降,E16天时降至E13天水平；实验组Hoxd4mRNA在E12天就处于表达高峰,E12,E13,E14天表达量均高于对照组同一时段的表达量(P=0.0000.05),到E15、E16天时,表达量稍低于对照组同一时段水平(P=0.0000.05)。 结论： 1.孕期特定时间一次性投入大剂量的全反式维甲酸可限制胚胎的生长发育,并造成神经管畸形在内的多种畸形。 2. RARa及Hoxd4基因的异常高表达可能是导致SD大鼠胎鼠神经管畸形发生的原因之一。
[Abstract]:Objective:
A model of neural tube malformation in SD rats was established through a one-time infusion of a large dose of vitamin A, all trans retinoic acid. The types of congenital malformation of fetal rats in E20 days and control groups were observed, the chances were recorded, the body weight was recorded and the body weight was compared, and the changes of the tissue structure were observed and compared. The limitation and toxicity of all trans retinoic acid on embryonic development and its teratogenicity; the neural tube of E12, E13, E14, E15, E16 days embryos of experimental and control groups was taken to detect the expression of RARamRNA and Hoxd4mRNA, to understand the abnormal expression of RARa and Hoxd4 during the formation of neural tube malformation, and to explore the possibility of the occurrence of neural tube malformation. The mechanism provides a theoretical basis for the prevention of neural tube defects.
Method锛，

本文编号：1932856