急性高氧肺损伤新生大鼠多脏器中AQP-1、5的表达及多巴酚丁胺的干预作用

发布时间：2018-06-04 09:34

  本文选题：多巴酚丁胺 + 水通道蛋白　； 参考：《苏州大学》2012年硕士论文

【摘要】：目的： 1、建立新生大鼠急性高氧肺损伤的模型；2、经与对照组对比，观察与比较急性高氧性损伤新生大鼠肺、脑及肾组织的病理组织学改变，以及水通道蛋白-1，5（Aquaporin，AQP-1、5）的表达变化，从而探讨AQP-1、5在急性高氧性肺损伤发病机制中的作用；3、通过药物干预的方法，探讨β-肾上腺素能受体激动剂多巴酚丁胺对高氧性多脏器损伤是否具有保护作用和对AQP-1、5及cAMP表达的影响，为临床防治高氧损伤提供依据。 方法： 72只出生3天内的新生Sprague Dawley（SD）大鼠随机分成3组：Ⅰ组：空气对照组； Ⅱ组：高氧＋生理盐水（高氧组）；Ⅲ组：高氧＋多巴酚丁胺（干预组），每组各24只。再按实验时间点3、7天分三个亚组各12只；每个亚组分灌洗组和非灌洗组，各6只。 将Ⅱ、Ⅲ组实验动物放于特制的氧箱中，持续输氧以保持箱内氧气浓度为90％～95％，Ⅰ组置于空气中；Ⅱ组腹腔注射等量的生理盐水，Ⅲ组自实验当日起每日同一时间点腹腔注射多巴酚丁胺（15mg/kg）。 灌洗组在各时间点行支气管肺泡灌洗，测定灌洗液及血清中蛋白含量，计算肺通透性指数（lung permeability index，LPI）；非灌洗组各时间点处死动物，取左肺称量后置于烤箱中测肺湿/干重比（wet/dry weight ratio，W/D），右上肺组织及部分大脑、肾组织行常规HE染色观察病理变化。 余下肺、脑、肾组织行westen-blot检查测定AQP-1、5蛋白含量，ELISA检测cAMP含量的变化。 结果： 1.各组实验动物一般情况的观察：Ⅰ组（空气组）中的实验动物在实验期间精神状态佳、反应灵敏，动作灵活，进食无异常。Ⅱ组（高氧组）中的实验动物逐渐出现症状，表现为烦躁、精神萎靡、反应迟钝、吃奶及活动减少，离氧后呼吸困难，皮毛无光泽等。Ⅲ组（干预组）中的实验动物情况介于前两者之间。 2.肺组织病理切片：Ⅰ组（空气组）实验动物肺组织病理切片见肺泡大小、形态及分布均匀，无组织充血及炎性改变；Ⅱ组（高氧组）高氧暴露3d后光镜下可见部分毛细血管扩张、充血，肺泡腔内有少量红细胞、炎症细胞和液体渗出；高氧暴露7d后肺泡数目明显减少，肺泡体积增大、间隔增宽，肺组织结构紊乱，毛细血管扩张、充血明显，炎症细胞浸润，肺泡腔内可见粉色渗出液。Ⅲ组（干预组）充血状况及炎症改变较Ⅱ组有明显减轻，肺间隔增宽不明显。 3.肺组织湿/干重比值（W/D）：各组之间比较表明：实验3天，Ⅱ组（高氧组）实验动物肺组织湿/干重比值（W/D）较Ⅰ组（空气组）增高，实验7天时，Ⅱ组（高氧组）较Ⅰ组（空气组）升高更明显，而Ⅲ组（干预组）与Ⅱ组（高氧组）相比，3天及7天的比值均有明显下降。 4.支气管肺泡灌洗液（BLAF）中蛋白含量测定：实验3天和7天时Ⅱ组（高氧组）BALF中蛋白含量均高于Ⅰ组（空气组），且随高氧暴露的时间延长而进一步增高；而Ⅲ组（干预组）与Ⅱ组（高氧组）相比，3天和7天BLAF中蛋白含量均有显著下降。 5.肺通透性指数（LPⅠ）的测定：实验3天，Ⅱ组（高氧组）较Ⅰ组（空气组）增高，且随时间递增，7天时升高更明显。而Ⅲ组（干预组）与Ⅱ组（高氧组）相比，3天及7天的比值均有明显下降。 6.肺组织中AQP-1、5表达及cAMP的变化：westen-blot检查测定结果表明：Ⅰ组（空气组）新生大鼠肺组织中AQP1、5蛋白高表达，且7天时表达较3天时表达增加。实验3、7天，Ⅱ组（高氧组）肺组织中AQP-1、AQP-5蛋白表达较空气组均有明显降低且随时间递减(P均0.05)。多巴酚丁胺干预组（Ⅲ组）AQP1及AQP5的表达在两个时间点均较高氧组升高，，7天时升高更明显，有显著性差异(P均0.05)。 7.脑组织病理表现及AQP1、AQP5表达的变化：Ⅱ、Ⅲ组高氧暴露下脑组织主要表现为脑水肿、皮质增厚和神经元变性， Ⅰ组无上述变化：Ⅰ组AQP5可见高表达，7天表达达高峰，Ⅱ组可见AQP5表达升高，7天较3天升高更明显，与同一时间点Ⅰ组相比有统计学差异(P均0.05)。Ⅲ组AQP5表达同Ⅱ组无明显差异(P0.05)。三组新生大鼠脑组织内均未检测到AQP1表达。 8肾组织病理表现及AQP1、AQP5表达的变化：Ⅱ、Ⅲ组肾脏暴露在高氧条件下后出现肾小球毛细血管充血、系膜细胞增生、肾小管上皮细胞细胞肿胀，间质增生及少量炎性细胞浸润，且随着高浓度氧暴露时间延长肾脏损伤逐渐加重。Ⅰ组无明显上述变化：Ⅰ组肾脏AQP1可见高表达，7天表达较3天减少，Ⅱ组可见AQP1表达减少，7天减少较3天更明显，与同一时间点空气组相比有统计学差异（P0.05）。Ⅲ组AQP1表达的变化同Ⅱ组比较无明显差异（P0.05）。三组肾组织中无论3天还是7天均未见AQP5表达。 结论： 1.长期的高浓度吸氧可导致新生大鼠的急性多脏器损伤，HE染色光镜下可观察到：肺组织局部充血和出血、炎症渗出、肺泡数目减少和结构组织紊乱；脑水肿、皮质增厚和神经元变性；肾小球毛细血管充血、系膜细胞及肾小管上皮细胞肿胀、间质增生、炎性细胞浸润。 2.在新生大鼠急性高氧性肺损伤模型中，AQP-1和AQP-5在肺组织中表达降低，且随吸氧时间的延长下降更明显，同时AQP-5随着脑组织损伤加重而高表达，AQP-1随着肾组织损伤加重表达下降，提示水通道蛋白在高氧多脏器损伤过程中起重要作用。 3.多巴酚丁胺可能通过提高cAMP表达加强AQP-1和AQP-5的表达，从而减轻炎症反应和肺水肿，对新生大鼠的高氧性肺损伤有一定保护作用，但临床应用还需进一步积累资料和研究。
[Abstract]:Objective:
1, to establish a model of acute hyperoxic lung injury in neonatal rats; 2, by comparing with the control group, the changes in the histopathology and the expression of Aquaporin (AQP-1,5) in the lungs, brain and kidney tissues of neonatal rats with acute hyperoxia injury were observed and compared, and the role of AQP-1,5 in the pathogenesis of acute hyperoxic lung injury was discussed. 3, the effect of dobutamine, a beta adrenergic receptor agonist, on the protection of hyperoxic multiple organ injury and the effect on the expression of AQP-1,5 and cAMP in the treatment of hyperoxia, and to provide a basis for the prevention and treatment of hyperoxia in clinical treatment.
Method锛

本文编号：1976884