小儿肾病综合征ox-LDL脂质肾损伤及肾康灵干预的机制研究

发布时间：2018-06-29 23:17

本文选题：原发性肾病综合征 + 肾康灵　；参考：《福建中医药大学》2013年博士论文

【摘要】：目的：体外实验以氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein, ox-LDL)诱导系膜细胞(mesangial cells,MCs)增殖,观察其分泌CXCL16、CD36、解聚素与金属蛋白酶10(a disintegrin and metalloprotease10, ADAM10)、ADAM17的水平以及丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)信号通路相关蛋白的磷酸化水平；体内实验以阿霉素肾病(adriamycin nephropathy,AN)大鼠为研究对象,观察其肾组织的CXCL16、CD36、 ADAM10、ADAM17水平及MAPK信号通路相关蛋白的活性,阐明脂质对肾损伤的作用机制。同时应用益肾活血中药肾康灵进行干预,观察治疗前后CXCL16、CD36、ADAM10、 ADAM17及MAPK信号通路相关蛋白的变化,从分子生物学及基因学水平进一步阐明益肾活血中药肾康灵干预PNS的作用机制,为提高小儿PNS的临床疗效和益肾活血法的临床应用奠定基础。方法： (1)基础研究：体外实验将MCs按随机数表法分为7组：①正常对照组；②ox-LDL组：③ox-LDL+CXCR6组：④ox-LDL+肾康灵低浓度组；⑤ox-LDL+1肾康灵高浓度组；⑥ox-LDL+阿托伐他汀低浓度组；⑦ox-LDL+阿托伐他汀高浓度组。采用MTT比色法测定MCs的增殖比率；分别采用ELISA法检测MCs的CXCL16、CD36、IFN-γ、IL-6、TNF-α含量,Real Time-PCR、Western blot法检测MCs的CXCL16、CD36、ADAM10、ADAM17的基因水平及其蛋白含量。采用Western Blot方法检测MAPK通路相关蛋白(p38、JNK、 ERK)及核因子-κB (nuclear factor kappa B,NF-κB)的磷酸化水平。体内实验将大鼠按体质量分层随机法分为5组：①正常组；②AN病模组；③肾康灵(低浓度)+西药组15只；④肾康灵(高浓度)+西药组；⑤西药组。各组连续灌胃22d。灌胃结束后,分别采用Real Time-PCR、Western blot法检测大鼠肾组织的CXCL16、CD36、ADAM10、ADAM17的基因水平及其蛋白含量,并检测尿蛋白定量及血白蛋白(albumin,ALB)、胆固醇(cholesterol,CH)水平,通过HE染色,电镜观察并分析肾组织病理形态学。 (2)临床研究：PNS患儿采用随机数表法分为肾康灵+西药组和西药组,同时在体检中心抽取健康体检儿童为健康对照组。采用ELISA法检测PNS患儿治疗前后血清CXCL16、 ADAM10、ADAM17的分泌变化,同时检测血ALB、CH、24小时尿蛋白定量等以进行疗效评价。结果： (1)基础研究：体外实验表明利用ox-LDL诱导大鼠系膜细胞增殖后,其表面CXCL16、 CD36、IFN-γ、IL6、TNF-α的表达显著升高(P0.01),加入CXCR6受体后,其表达水平进一步升高(P0.01),肾康灵含药血清组呈浓度依赖性降低上述指标(P0.01); ox-LDL诱导大鼠系膜细胞增殖后,CXCL16、CD36、ADAM10、ADAM17的基因水平和蛋白含量显著升高(P0.01),加入CXCR6受体后,其基因水平和蛋白含量进一步升高(P0.01),肾康灵含药血清组呈浓度依赖性降低上述指标(P0.01或P0.05); ox-LDL诱导大鼠系膜细胞增殖后,MCs表面的p38、ERK1/2、SAPK/JNK、NF-κ Bp65的磷酸化水平显著升高(P0.01),加入CXCR6受体后,其磷酸化水平进一步升高(P0.01),肾康灵含药血清组呈浓度依赖性降低ERK1/2、SAPK/JNK、NF-κ B p65的磷酸化水平(P0.01)。体内实验表明AN大鼠的尿蛋白定量升高、血清ALB降低、CH升高、肾组织的CXCL16、CD36、 ADAM10、ADAM17的基因水平和蛋白含量升高,p38、ERK1/2、SAPK/JNK、NF-κ B p65的磷酸化水平升高(P0.01),肾康灵+西药松组呈浓度依赖性降低CXCL16、CD36、 ADAM10、ADAM17的表达,降低p38、ERK1/2、SAPK/JNK、NF-κ Bp65的磷酸化水平(P0.01)；肾康灵(高、低浓度)+西药组的CH水平与西药组相比显著降低(P0.01或P0.05)。 (2)临床研究表明,PNS患儿的尿蛋白定量升高、血清ALB降低、CH升高、CXCL16、 ADAM10、ADAM17的含量升高(P0.01),肾康灵+西药治疗组在降低尿蛋白定量、CH及血清CXCL16、ADAM10、ADAM17的含量方面明显优于西药组(P0.01或P0.05)。结论： (1)ox-LDL可促使系膜细胞释放CXCL16、CD36、ADAM10、ADAM17等炎症介质,CXCR6可介导这一途径。ox-LDL激活了MAPK信号转导通路,使p38、ERK1/2、 SAPK/JNK的磷酸化水平升高,激活了NF-κ Bp65的活性,CXCR6-CXCL16介导MAPK信号途径。 (2)益肾活血中药肾康灵通过降低CXCL16、CD36、ADAM10、ADAM17等炎症介质的释放及抑制MAPK信号转导通路的激活,从而抑制系膜细胞的增殖,降低尿蛋白、CH水平,有效地改善AN大鼠的病理损伤和PNS患儿的临床症状。
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【学位授予单位】：福建中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R272;R285

【参考文献】