酸敏感离子通道在过敏性紫癜肾损伤的作用

发布时间：2018-10-10 12:44

【摘要】：目的观察酸敏感离子通道(acid-sensing ion channels,ASICs)在过敏性紫癜(Henoch-Schonlein purpura,HSP)患儿肾组织中的表达及细胞外酸化诱导ASICs在人肾小管上皮细胞表达情况,探讨其在过敏性紫癜患儿肾损伤中的作用,进一步阐明药物阻断ASICs可能是治疗过敏性紫癜患儿肾损伤的新靶点。方法1.选取2013年1月—2015年1月在安徽医科大学第一附属医院儿科和肾内科做肾穿的紫癜性肾炎(Henoch-Schonlein purpura nephritis,HSPN)患儿13例,其中男性6例,女性7例,发病年龄为5岁2个月~13岁4个月,在肾穿后收集其肾活检组织。对照组7例,为单纯肾病综合征患儿,其中男性3例,女性4例,发病年龄为4岁3个月~14岁1个月,收集其正常肾组织活检,按照免疫组化试剂盒操作方法检测ASICs在HSPN及单纯肾病综合征患儿肾组织中的表达情况,同时将HSPN患儿24 h尿蛋白定量与肾组织中ASICs的表达量做相关性分析,另外将HSPN患儿根据尿系列蛋白检查αl-MG是否异常分为正常组和异常组,根据β2-MG是否异常也分为正常组和异常组,观察ASICs在其两组HSPN患儿肾小管中的表达情况。2.以人肾小管上皮细胞(Human kidney tubular epithelial cell,HKC)作为研究对象,将肾小管上皮细胞分别在pH7.4(对照组)、pH7.0、pH6.5、pH6.0、pH5.5不同的胞外环境下培养3h,经处理后,然后在正常培养基条件下培养4h,用western blot法测定不同酸刺激下肾小管上皮细胞ASICs的表达;肾小管上皮细胞分组如下:pH 7.4(正常组),pH6.5(对照组),pH6.5+Amiloride(终浓度100umol/L)、pH6.5+Pc Tx-1(终浓度100ng/ml),各组于给药30min后,在pH6.5的培养基共培养3h,然后在pH7.4的正常培养基继续培养4h,收集细胞进行检测30min后,用western blot法测定Keratins(K7、K18、K19)蛋白的表达。结果1.ASICs在HSPN患儿肾组织中的表达免疫组化结果显示HSPN组ASIC1a、ASIC2a、ASIC3在肾组织中的表达明显高于对照组(P0.01),且主要表达于肾小管;2.ASICs在不同蛋白尿HSPN患儿肾小管中的表达情况HSPN患儿肾小管上的表达量与24 h尿蛋白定量呈正相关(r=0.644,P=0.017)。ASIC3在αl-MG异常组和β2-MG异常组中的表达较正常组显著增多(P0.01),ASIC2a在αl-MG异常组中的表达较正常组增多(P0.05);3.不同酸刺激下肾小管上皮细胞ASICs的表达情况ASIC1a、ASIC2a、ASIC3在pH7.0、pH6.5、pH6.0、pH5.5中肾小管上皮细胞的表达较pH7.4(对照组)明显增多,差异有统计学意义。4.Keratins(K7、K18、K19)蛋白的表达Keratins(K7、K18和K19)蛋白在pH6.5组较pH7.4组在肾小管上皮细胞的表达明显增多(P0.01),K18在pH6.5+Amiloride(终浓度100umol/L)组及pH6.5+Pc Tx-1(终浓度100ng/ml)组较pH6.5组在肾小管上皮细胞的表达减少(P0.05),K7,K19在pH6.5+Amiloride(终浓度100umol/L)组及pH6.5+Pc Tx-1(终浓度100ng/ml)组较pH6.5组在肾小管上皮细胞的表达明显减少(P0.01)。结论在HSPN患者的肾组织中存在ASICs高表达,尤其在肾小管中。ASICs与HSPN患儿蛋白尿,尤其是微量蛋白尿的产生可能存在一定关系。细胞外酸化诱导下人肾小管上皮细胞ASICs和肾小管上皮细胞损伤蛋白Keratins(K7、K18、K19)蛋白表达明显增多。阻断ASICs可以减少Keratins(K7、K18和K19)蛋白的表达,提示ASICs阻滞剂可以减轻或阻断肾损伤的发生。
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【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R726.9
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本文编号：2261813