RhEPO对HIBD新生大鼠脑组织水通道蛋白-4表达的影响

发布时间：2018-11-24 16:27

【摘要】：目的通过研究不同剂量重组人促红细胞生成素(RhEPO)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后脑组织中水通道蛋白4(AQP-4)的影响,以探讨EPO的神经保护作用。 方法选取7日龄SD大鼠100例,随机分为假手术组(20例)、对照组(20例)、RhEPO治疗组[低剂量组(20例)、中剂量组(20例)、高剂量组(20例)]。假手术组仅分离右颈总动脉,不予结扎,不缺氧缺血不给予药物。RhEPO治疗组和对照组分离右颈总动脉结扎,后置8%氧气2h制备新生大鼠HIBD模型。于模型建立后立即对低剂量组、中剂量组、高剂量组腹腔注射不同剂量的RhEPO1000IU/kg、2500IU/kg、5000IU/kg,隔日1次,连续4次,对照组和假手术组腹腔注射等体积的0.9%盐水。每组随机取10例于模型建立后3d、7d两个时间点处死。HE染色观察脑组织病理形态学变化并应用免疫组织化学方法和计算机图像分析技术检测脑组织中AQP-4阳性细胞数变化。 结果1.与对照组相比,3d时RhEPO治疗组AQP-4阳性细胞数明显减少(26.6±4.67、36.6±3.97、20.8±7.9、23.0±9.6,P0.05),中剂量和高剂量组较低剂量组AQP-4阳性细胞数明显减少(P0.05)。对照组较假手术组AQP-4阳性细胞数明显增多(P0.05)。2.与对照组相比,7d时中剂量组、高剂量组AQP-4阳性细胞数仍明显减少(33.2±4.38、25.6±7.63,P0.05),高剂量组较中剂量组、中剂量组较低剂量组AQP-4阳性细胞数明显减少(P0.05),各组AQP-4阳性细胞数均较假手术组明显增高(P0.05)。3.HE染色显示模型建立后3d时对照组和RhEPO治疗组右侧脑组织出现神经元肿胀、变性、凋亡和坏死,至7d时病理变化减轻,但相同时间RhEPO治疗组右侧脑组织细胞水肿、变性、凋亡和坏死均较对照组减轻。与低剂量组大脑皮质和海马区病理改变相比较,中剂量组和高剂量组锥体细胞层次较多,细胞边界较清楚,出现坏死及凋亡的数量明显减少。假手术组两侧和对照组左侧脑组织结构无异常病理改变。 结论新生大鼠在HIBD后脑组织中AQP-4表达明显增加,与HIBD后脑水肿严重程度密切相关。RhEPO可下调HIBD新生大鼠AQP-4蛋白的表达,从而有效的减轻脑水肿,发挥神经保护作用。RhEPO神经保护作用存在剂量依赖效应,2500IU/kg和5000IU/kg较1000IU/kgRhEPO减轻脑水肿的作用更明显。
[Abstract]:Objective to investigate the effects of recombinant human erythropoietin (RhEPO) at different doses on the expression of aquaporin-4 (AQP-4) in brain tissue after hypoxic-ischemic brain injury (HIBD) in neonatal rats and to explore the neuroprotective effect of EPO. Methods 100 7-day-old SD rats were randomly divided into sham operation group (n = 20) and control group (n = 20) [low dose group (n = 20), middle dose group (n = 20), high dose group (n = 20)]. In the sham-operated group, the right common carotid artery was isolated, without ligation, no hypoxia and ischemia, and the right common carotid artery was ligated in the RhEPO treatment group and the control group. The neonatal rat HIBD model was induced by 8% oxygen for 2 h after the ligation of the right common carotid artery. Immediately after the establishment of the model, intraperitoneal injection of different doses of RhEPO1000IU/kg,2500IU/kg,5000IU/kg, was given once every other day to low dose group, middle dose group and high dose group, and 0.9% saline was injected intraperitoneally in control group and sham operation group. Ten patients in each group were killed at two time points 3 days after the establishment of the model. The pathological changes of brain tissue were observed by HE staining and the changes of AQP-4 positive cells in brain tissue were detected by immunohistochemical method and computer image analysis technique. Result 1. Compared with the control group, the number of AQP-4 positive cells in the RhEPO treatment group was significantly lower than that in the control group (26.6 卤4.67) (26.6 卤4.67 卤36.6 卤3.97,20.8 卤7.9 卤23.0 卤9.6 (P0.05). The number of AQP-4 positive cells in middle and high dose groups was significantly lower than that in low dose groups (P0.05). The number of AQP-4 positive cells in the control group was significantly higher than that in the sham operation group (P0.05). Compared with the control group, the number of AQP-4 positive cells in the high dose group was significantly lower than that in the control group at 7 days (33.2 卤4.38 卤25.6 卤7.63 P 0.05), and the number of AQP-4 positive cells in the high dose group was significantly lower than that in the middle dose group. The number of AQP-4 positive cells in middle dose group was significantly lower than that in low dose group (P0.05). The number of AQP-4 positive cells in each group was significantly higher than that in sham-operated group (P0.05). 3.HE staining showed that neurons swelling, degeneration, apoptosis and necrosis appeared in the right brain tissue of the control group and RhEPO treatment group 3 days after the establishment of the model. At the 7th day, the pathological changes were alleviated, but the edema, degeneration, apoptosis and necrosis of the right brain tissue in the RhEPO treatment group were less than those in the control group at the same time. Compared with the pathological changes of cerebral cortex and hippocampus in the low dose group, the pyramidal cells in the middle dose group and the high dose group were more stratified, the cell boundary was clear, the number of necrosis and apoptosis was significantly decreased. There were no abnormal pathological changes in both sides of the sham operation group and the control group. Conclusion the expression of AQP-4 in the brain tissue of neonatal rats after HIBD is significantly increased, which is closely related to the severity of cerebral edema after HIBD. RhEPO can down-regulate the expression of AQP-4 protein in HIBD neonatal rats, thereby effectively attenuating brain edema. The neuroprotective effects of RhEPO were dose-dependent and 2500IU/kg and 5000IU/kg were more effective than 1000IU/kgRhEPO in alleviating brain edema.
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R722.19

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本文编号：2354360