急性病毒性脑炎及脑膜炎常见病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立和应用

发布时间：2018-11-25 21:15

【摘要】：目的建立肠道病毒(EV)、腺病毒(ADV)、EB病毒(EBV)、腮腺炎病毒(MuV)、人类疱疹病毒6型(HHV-6)、巨细胞病毒(CMV)、单纯疱疹病毒2型(HSV-2)、麻疹病毒(MV)、双埃可病毒(HPeV)、水痘带状疱疹病毒(VZV)、乙型脑炎病毒(JEV)、单纯疱疹病毒1型(HSV-1)实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测方法。方法根据文献合成针对各病毒基因片段的特异性引物和TaqMan探针，构建质粒标准品，评估该方法的特异性、灵敏度和重复性。结果 1.获得EV、ADV、EBV、MuV、HHV-6、CMV、HSV-2、MV、HPeV、JEV、HSV-111种病毒的目的片段并成功构建上述各病毒的质粒。 2.所建立的EV、ADV、EBV、MuV、HHV-6、CMV、HSV-2、MV、HPeV、VZV、JEV、HSV-1FQ-PCR检测系统灵敏度分别为1.30×10~1拷贝数/μl、6.74×10~0拷贝数/μl、1.44×10~1拷贝数/μl、3.24×10~1拷贝数/μl、3.00×10~0拷贝数/μl、5.72×10~0拷贝数/μl、7.00×10~0拷贝数/μl、5.39×10~1拷贝数/μl、5.76×10~0拷贝数/μl、1.89×10~1拷贝数/μl、6.49×10~0拷贝数/μl、7.43×10~0拷贝数/μl，各标准品的浓度与Ct值间呈线性关系，R~2均大于0.99；扩增效率在0.9~1.1之间；同一样本重复检测3次，各组内样本Ct值的变异系数最大为1.46%，各组间样本Ct值的变异系数最大为3.13%；特异性检测中各自阳性标本出现阳性扩增曲线，非阳性标本未出现阳性扩增曲线。结论本实验建立的EV、ADV、EBV、MuV、HHV-6、CMV、HSV-2、MV、HPeV、VZV、JEV、HSV-1FQ-PCR检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好，具有应用于临床检验的潜在价值。目的了解2010年7月~2011年10月年长沙地区急性病毒性脑炎和脑膜炎住院儿童常见病毒的流行特点，为本地区儿童急性病毒性脑炎和脑膜炎的防治提供科学依据。方法 1.收集2010年7月~2011年10月在湖南省人民医院儿科医学中心诊断为急性病毒性脑炎及脑膜炎的住院患儿脑脊液(CSF)标本。 2.采用FQ-PCR方法检测肠道病毒(EV)、腺病毒(ADV)、EB病毒(EBV)、腮腺炎病毒(MuV)、人类疱疹病毒6型(HHV-6)、巨细胞病毒(CMV)、单纯疱疹病毒2型(HSV-2)、麻疹病毒(MV)、双埃可病毒(HPeV)、水痘带状疱疹病毒(VZV)、乙型脑炎病毒(JEV)、单纯疱疹病毒1型(HSV-1)。 3.对各病毒检出结果结合临床资料进行统计学分析。结果 1.建立的FQ-PCR方法能检测急性病毒性脑炎和脑膜炎儿童CSF中的常见病毒。 2.2010年7月~2011年10月共收集CSF标本93份，其中临床诊断为急性病毒性脑炎27例，急性病毒性脑膜脑炎22例，急性病毒性脑膜炎44例，共36份检出病毒，总检出率38.71%(36/93)，，其中EV最为常见，检出率为24.73%(23/93)；ADV检出率5.38%(5/93)；EBV检出率4.30%(4/93)；MuV检出率为3.23%(3/93)；HHV-6、CMV、HSV-2检出率均为2.15%(2/93)；MV、HPeV检出率均为1.08%(1/93)；未检出VZV、JEV、HSV-1。 3.急性病毒性脑炎以5岁以上年龄段为主，急性病毒性脑膜炎以1~5岁年龄段常见，但阳性检出率在季节、年龄段及性别之间无统计学意义。 4.急性病毒性脑炎及脑膜炎病毒检出阳性与阴性病例在临床症状、体征、CSF留取时间及脑电图结果之间差异无统计学意义；急性病毒性脑炎病例病毒检出阳性与阴性之间CSF实验室检查中除白细胞计数有差异外，其余各项检查结果之间比较差异均无统计学意义；急性病毒性脑膜炎病例中病毒检出阳性与阴性之间CSF实验室检查比较差异均无统计学意义。结论 1.建立的FQ-PCR方法能检测急性病毒性脑炎和脑膜炎儿童CSF中的常见病毒。 2.本研究期间内，分别检出EV、ADV、EBV、MuV、HHV-6、CMV、HSV-2、MV、HPeV9等种病毒，总检出率38.71%，以EV最多见。 3.急性病毒性脑炎与脑膜炎的病毒阳性检出率在季节、年龄段、性别之间均无差异。 4.病毒检出阳性与阴性病例在临床症状、体征、CSF留取时间及脑电图结果之间无明显不同。
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【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R725.1

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