E64d对活体缺氧缺血性脑损伤新生大鼠松果体的短期影响

发布时间：2018-11-27 21:32

【摘要】：目的：了解缺氧缺血性脑损伤（Hypoxic-ischemic brain damage，HIBD）模型中松果体的损伤情况，了解凋亡、自噬及坏死相关蛋白的改变，初步探讨E64d在HIBD后松果体损伤修复中的短期作用及可能机制。 方法：采用7日龄新生SD（Sprague Dawley）大鼠，根据改良Rice-Vannucci法建立HIBD模型。将新生大鼠随机分为E64d干预组（E64d组）、不干预组（DMSO组）、假手术组（Sham组），并选取HIBD后2h、6h、12h、24h、48h五个时间点，通过Western blot法测定松果体Cleaved caspase-3、Beclin-1、Spectrin αⅡ蛋白浓度的变化；采用HE染色及免疫组织化学法观察松果体组织Cleaved caspase-3、IL-21染色情况，从细胞层面了解松果体组织损伤情况并探讨可能的机制。 结果：1、Western blot法提示：与Sham组比，DMSO组松果体细胞凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3在6h明显升高，12h达到高峰，至少持续至24h，到48h开始下降（P0.05）；与DMSO组比，E64d组Cleaved caspase-3在6h、12h左右出现下降(P0.05)，但24h后已无统计学差异（P0.05）。免疫组化法提示：Cleaved caspase-3在间质细胞及松果体细胞中均有表达，与Sham组比，DMSO组Cleaved caspase-3在2h即表达明显增强，48h时仍高（P0.05）；与DMSO组比，E64d组2h表达Cleavedcaspase-3明显下降(P0.05)，但48h已无作用（P0.05）。 2、与Sham组比，DMSO组自噬相关蛋白Beclin-1升高，在6h的时候出现统计学差异，24h达到高峰，至少持续至48h仍存在明显升高(P0.05)；与DMSO组比，E64d组松果体组织表达Beclin-1在24h出现显著下降（P0.05），其余时间点无统计学差异（P0.05）。 3、与Sham组比，DMSO组松果体细胞质膜骨架蛋白Spectrin αⅡ分解增多，除6h点外，各时间点上均有明显升高，高峰在12h左右（P0.05）；与DMSO组比，，使用E64d在一定时间内减少了细胞骨架的分解，保护了质膜完整性，在12h、24h存在统计学意义（P0.05），但之后坏死仍在上升，48h已无明显差异（P0.05）。 4、免疫组化显示松果体组织细胞间质中存在IL-21，2h三组之间无差别（P0.05），与Sham组比，DMSO组表达的IL-21在48h的时候明显升高（P0.05）；与DMSO组比，E64d组松果体IL-21显著下降（P0.05）。 结论：1、HIBD后松果体短期内出现细胞损伤，表现为核溶解及碎裂，部分细胞分界模糊，并且牵涉到凋亡、自噬及坏死三种形式。 2、在本实验中，腹腔注射E64d对HIBD后活体松果体有着直接的影响。对松果体凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3、细胞骨架蛋白Spectrin αⅡ影响较大，而对自噬相关蛋白Beclin-1的影响相对较小。该模型中，E64d早期能抑制凋亡，保护细胞质膜完整性，但保护作用时间在24小时内。E64d未能完全逆转松果体组织的损伤进程。 3、HIBD后松果体损伤可能存在机体免疫机制参与，机体可能藉由局部组织IL-21的上调参与损伤进程，而E64d能明显降低IL-21的表达。
[Abstract]:Objective: to investigate the changes of apoptosis, autophagy and necrotizing related proteins in the pineal gland in hypoxic-ischemic brain injury (Hypoxic-ischemic brain damage,HIBD) model. To explore the short-term role and possible mechanism of E64d in the repair of pineal injury after HIBD. Methods: 7 day old neonatal SD (Sprague Dawley) rats were used to establish HIBD model according to the modified Rice-Vannucci method. Neonatal rats were randomly divided into four groups: E64d intervention group (E64d group), non-intervention group (DMSO group) and sham operation group (Sham group). Five time points were selected at 2 h, 6 h, 12 h, 24 h and 48 h after HIBD, and the pineal Cleaved caspase-3,Beclin-1, was measured by Western blot method. The change of Spectrin 伪 鈪

本文编号：2362091