麻黄碱对脑缺氧缺血后新生大鼠神经功能的影响

发布时间：2020-03-21 07:33

【摘要】： 第一部分麻黄碱对缺氧缺血性脑损伤后新生大鼠脑组织Nogo-A和突触素表达的影响目的: 探讨髓鞘相关蛋白Nogo-A和突触素在缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织的表达特点及麻黄碱对其表达的影响。方法: 健康Sprague-Dawley新生大鼠96只,随机分为假手术组,HIBD组和麻黄碱治疗组,每组32只。于7日龄行左侧颈总动脉结扎,吸入8%O2+ 92%N2混合气体行缺氧处理2小时,制成HIBD模型。假手术组只作左颈总动脉分离而不结扎,不作缺氧处理。麻黄碱组于建模成功后腹腔注射麻黄碱1.5 mg·kg-1,假手术组和HIBD组大鼠腹腔注射等量生理盐水。上述各组干预均为每日1次,共7日。术后1、2、3、4周,各组大鼠均随机抽取8只,于麻醉下处死取脑,HE染色观察脑组织病理变化,免疫组化法检测髓鞘相关蛋白Nogo-A和突触素表达情况。结果: 1.脑组织病理变化情况:光镜下可见缺氧缺血脑损伤大鼠脑组织皮质和海马有明显的神经病理损伤,上述改变在麻黄碱组明显减轻。 2. Nogo-A蛋白表达情况:假手术组各时间点大鼠脑组织Nogo-A表达无明显变化,差异无统计学意义( P 0.05);与假手术组相比,HIBD组术后各时间点脑组织Nogo-A表达均增高,差异有统计学意义( P 0.01);与HIBD组相比,麻黄碱治疗组第2,3,4周Nogo-A表达明显减少,差异有统计学意义( P 0.01)。 3. SYP蛋白表达情况:与假手术组相比,HIBD组术后各时间点脑组织突触素表达均减少,差异有统计学意义( P 0.01);与HIBD组相比,麻黄碱治疗组第1,2,3周突触素表达明显增加,差异有统计学意义( P 0.01)。结论: 新生大鼠HIBD后脑组织Nogo-A表达增高,可能是中枢神经损伤后再生障碍的重要因素之一。麻黄碱可下调脑组织HIBD后Nogo-A的表达,促进突触素的表达,从而有利于新生动物HIBD后神经轴突的再生。第二部分麻黄碱联合高压氧治疗对脑缺氧缺血后新生大鼠神经功能的影响目的: 探讨麻黄碱联合高压氧治疗对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后神经可塑性的影响及其分子机制。方法: 新生Sprague-Dawley大鼠80只,随机分成5组:假手术组,缺氧缺血组,麻黄碱治疗组,高压氧治疗组以及麻黄碱和高压氧联合治疗组,每组16只。于7日龄行左侧颈总动脉永久结扎,吸入8%O2+ 92%N2混合气体行低氧处理2小时,制成缺氧缺血性脑损伤模型。假手术组只作左颈总动脉分离而不结扎,不缺氧。麻黄碱组每日腹腔注射麻黄碱1.5 mg·kg-1,高压氧组每日以2.5个大气压行2小时干预,联合治疗组给予麻黄碱和高压氧治疗,假手术组和缺氧缺血组大鼠每日腹腔注射等量生理盐水,上述各组干预均为每日一次,共7日。测定术后1周体重增长率。各组大鼠均于术后1周麻醉下处死8只取脑,HE染色观察脑组织病理变化,免疫组化法检测半胱天冬氨酸蛋白-3(Caspase-3)和轴突再生抑制蛋白(Nogo-A)表达情况。余新生鼠喂养至术后4周行5天的Morris水迷宫学习和记忆的测试。结果: 1.体重增长及增长率:HI后1周时各治疗组体重增长率大于HIBD组,差异具有统计学意义( P 0.05)。与单一治疗组相比,联合治疗组的体重增长率增加,差异具有统计学意义( P 0.05)。 2.脑组织病理变化情况:HE染色观察到HIBD后脑组织广泛的神经元变性和水肿,正常排列结构消失。上述改变在麻黄碱和高压氧单一治疗组有所减轻;联合治疗组神经细胞的坏死及变性程度较HIBD组明显减轻,仅见少量神经元出现轻度皱缩。 3. Caspase-3和Nogo-A蛋白表达情况:与缺氧缺血组相比,麻黄碱、高压氧单用及两者联用组脑组织Caspase-3和Nogo-A表达均减少,差异具有统计学意义( P 0.01);两者联用组Caspase-3和Nogo-A表达较单治疗组减少,差异具有统计学意义( P 0.01)。 4.行为学检测:Morris水迷宫实验显示:第2-5天各组平均逃避潜伏期明显短于缺氧缺血组( P 0.05) ,平台穿过次数各组均多于缺氧缺血组( P 0.05);与两单治疗组相比,第3-5天两者联用组平均逃避潜伏期较短(P 0.01),平台穿过次数较多(P 0.05)。结论: 麻黄碱和高压氧治疗均能减轻新生大鼠缺氧缺血引起的脑组织损伤,提高新生缺氧缺血性脑损伤大鼠年长后的空间定向能力和学习记忆能力。与单一治疗相比,两者联用具有更加显著的保护作用。其机制考虑与下调缺氧缺血性脑损伤后Caspase-3和Nogo-A的表达有关。
【图文】：

病理改变,HE染色,麻黄碱

25图 1 HIBD 后 1 周海马组织病理改变（HE 染色，×200）1-1 假手术组：海马区细胞排列整齐，轮廓正常；1-2 HIBD 组：大量细胞水肿，弥漫性神经元丢失；1-3 麻黄碱组，仅见少量神经元出现轻度皱缩Figure1 Pathological changes in thehippocampus of neonatal rats 1 wk afterhypoxic-ischemic brain damage (HIBD)(Hematoxylin-eosin staining, × 200).1-1 Normal cell structure in the lefthippocampus in the sham operation group; 1-2cellular edema and diffuse neuronaldegeneration in the HIBD group; 1-3 slightshrinkage in the ephedrine group.图 2 HIBD 损伤后 3 周 Nogo-A 在大脑皮表达 (免疫组化染色，×400)2-1 假手术组：Nogo-A 阳性细胞较少，，较淡；2-2 HIBD 组：Nogo-A 呈强阳性表染色较深；2-3 麻黄碱组：Nogo-A 阳性散在分布，染色较淡Figure 2 Nogo-A expression incerebral cortex at 3 wk hypoxic-ischemic brain damage (H(Immunohistochemical staining, × 400).2-1 Increased immunoreactive cells insham operation group; 2-2 immunoreacells in the HIBD group; 2-3 only aimmunoreactive cells in the ephedrine grou

损伤后,免疫组化染色,麻黄碱

25图 1 HIBD 后 1 周海马组织病理改变（HE 染色，×200）1-1 假手术组：海马区细胞排列整齐，轮廓正常；1-2 HIBD 组：大量细胞水肿，弥漫性神经元丢失；1-3 麻黄碱组，仅见少量神经元出现轻度皱缩Figure1 Pathological changes in thehippocampus of neonatal rats 1 wk afterhypoxic-ischemic brain damage (HIBD)(Hematoxylin-eosin staining, × 200).1-1 Normal cell structure in the lefthippocampus in the sham operation group; 1-2cellular edema and diffuse neuronaldegeneration in the HIBD group; 1-3 slightshrinkage in the ephedrine group.图 2 HIBD 损伤后 3 周 Nogo-A 在大脑皮表达 (免疫组化染色，×400)2-1 假手术组：Nogo-A 阳性细胞较少，较淡；2-2 HIBD 组：Nogo-A 呈强阳性表染色较深；2-3 麻黄碱组：Nogo-A 阳性散在分布，染色较淡Figure 2 Nogo-A expression incerebral cortex at 3 wk hypoxic-ischemic brain damage (H(Immunohistochemical staining, × 400).2-1 Increased immunoreactive cells insham operation group; 2-2 immunoreacells in the HIBD group; 2-3 only aimmunoreactive cells in the ephedrine grou
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R722.1

【参考文献】