地塞米松联合黄芪甲苷对足细胞损伤的保护作用机制

发布时间：2020-03-22 04:45

【摘要】：目的:通过人补体片段C5b6及人血清在体外作用于小鼠足细胞,建立亚溶破模型,并予不同浓度的地塞米松(dexamethasone,DEX)、黄芪甲苷(astragaloside,AST)预处理足细胞,探讨地塞米松、黄芪甲苷是否对补体所致的足细胞损伤是否具有保护作用,其保护作用是否与增加了nephrin蛋白的表达量有关。方法:1.选择适宜浓度的人C5b6与人血清在体外反应,作用于小鼠足细胞,建立亚溶破模型。2.足细胞分为以下组别:对照组,高剂量(1×10-5mol/L)、中剂量(1×10-6mol/L)、低剂量(1×10-7mol/L)地塞米松组,高剂量(600μg/ml)、中剂量(400μg/ml)、低剂量(200μg/ml)黄芪甲苷组、高剂量地塞米松+黄芪组及模型组。对照组不予任何处理,模型组仅建立足细胞亚溶破模型,实验组则在建立模型前给予药物预处理12小时。3.MTT法观察各组足细胞活力变化。4.Western印记法检测各组足细胞nephrin蛋白的相对表达量。结果:1.足细胞亚溶破模型的建立:借助由LDH释放实验所绘制的细胞毒性曲线,0.2μg/ml为引起LDH释放率明显增加的临界C5b6剂量,故选择其为建立足细胞亚溶破模型的C5b6浓度。2.地塞米松、黄芪甲苷预处理足细胞后活力变化:实验组在建立足细胞亚溶破模型前,使用地塞米松、黄芪甲苷预处理足细胞12小时。高剂量地塞米松组及高剂量黄芪甲苷组优于低剂量组,其中高剂量地塞米松+黄芪甲苷联合组明显优于单独的地塞米松组及黄芪甲苷组。3.地塞米松、黄芪甲苷预处理足细胞后nephrin蛋白表达的变化:二者预处理足细胞后均可检测到nephrin蛋白的表达上调,且这种作用呈剂量依赖性。高剂量地塞米松+黄芪甲苷联合组的作用明显优于单独的地塞米松组及黄芪甲苷组。结论:1.地塞米松、黄芪可以减轻亚溶量C5b-9所致的足细胞损伤,二者联合使用具有协同作用。2.二者对足细胞损伤的保护机制与上调nephrin蛋白表达有关。
【图文】：

足细胞,形态学特点

第 4 章实验结果第 4 章实验结果足细胞的形态学特点鼠足细胞 MPC5[14]由转基因小鼠的肾小球分离培养获得，所表达的40 大 T 抗原受到γ干扰素（IFN-γ）诱导的启动子调控。在 33℃，有件下，足细胞仅增殖不分化，逐渐生长融合呈“铺路石样”外观无 IFN-γ存在条件下后，足细胞停止增殖，逐渐分化，胞体增大，出明显突起，呈星型结构，相邻足细胞的突起可相互交叉形成连接样”外观（如图 1 所示）。

曲线,细胞毒性,足细胞,曲线

图 2：细胞毒性曲线4.3 足细胞活力测定4.3.1 地塞米松预处理足细胞后活力测定在建立足细胞亚溶破模型前，，予不同浓度的地塞米松溶液预处理足细胞 12h，MTT 法检测足细胞活力为：空白组（1.20±0.03）、1×10-5mol/L 组（0.82±0.03）、1×10-6mol/L 组（0.73±0.03）、1×10-7mol/L 组（0.54±0.05）以及模型组（0.40±0.04）。地塞米松各亚组与模型组相比（如图 3 所示），以及三组内部相比差异均有统计学意义，P 均小于 0.05。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R726.9

【参考文献】