【摘要】： 目的 肺动脉高压是指肺动脉内压力高于正常，在海平面水平，正常人静息状态下肺动脉收缩压的正常范围是20～25mmHg，，肺动脉平均压测量值＜20mmHg。如肺动脉收缩压＞30mmHg，或肺动脉平均压≥20mmHg则认为存在肺动脉高压。肺动脉收缩反应增强和肺血管结构重建是肺动脉高压主要的病理生理改变。肺血管收缩反应增强属功能性改变，是可逆的；肺血管结构重建以肺动脉平滑肌细胞增殖、无肌型动脉肌化、胶原等细胞外间质在肺血管壁沉积为特征，属不可逆性的结构性改变。 血管可以通过内皮细胞、平滑肌细胞等产生的血管活性物质对其张力进行自身调节。他们分泌的扩血管物质减少和／或血管对其反应性减弱，以及缩血管物质分泌增多和／或血管对其反应性增强，皆可以使肺动脉的收缩性增加，进而引起肺血管的重建，例如内皮素-1(endothelin-1，ET-1)是目前已知最强的缩血管物质。 近年来人们发现了一种新的血管活性物质—肾上腺髓质素(adrenomedullin，ADM)，它的降压效应引起了人们的注意。ADM可显著降低低氧性肺动脉高压大鼠及肺动脉高压病人的肺动脉压力，改善心功能。研究证实ADM前体(proadrenomedullin，proADM)在体内经内源性肽酶的作用可以降解产生4个不同的活性肽段：PAMP、proADM45-92、ADM和ADT。ADM具有扩血管、抑制平滑肌细胞增殖的作用，ADT可收缩血管、升高血压、促进血管平滑肌细胞增殖。通过对主动脉血管环和血管平滑肌细胞增殖的研究发现，ADM和ADT这两个同一前体分子的不同肽段在血管活性上相互拮抗，在释放上交互抑制，这是分子内调控(intramolecular regulation，IMR)学说的一种表现，即同一心血管活性多肽的前体分子内部不同肽段之间存在的相互调节现象。分子内调控学说的提出对于研究ADM体系在左向右分流肺动脉高压形成机制和肺血管结构重建中的作用提供了一条全新的思路。 本研究的目的是检测肾上腺髓质素(ADM)前体各活性肽段在左向右分流肿动脉高压大鼠肺内的分布及其含量的变化，为左向右分流肺动脉高压的分子生物学理论提供有力的证据，同时也为ADM通过阻止MAPK这一细胞增殖的最终途径来实现其延缓肺动脉高压发生的说法提供依据。 方法 1．Wistar大鼠30只，随机分为2组，将实验组大鼠的左侧颈总动脉与颈外静脉用套管进行连接，对照组大鼠仅切开颈部皮肤分别分离颈总动脉和颈外静脉后缝合皮肤，不进行血管连接术。 2．术后8周，右心室导管法测取大鼠肺动脉收缩压；分离心脏为右心室和(室间隔+左心室)，计算二者重量比；HE染色观察大鼠肺血管的病理变化，测量中等肺动脉的中膜厚度所占管径百分比。 3．采用免疫组化法和Western blotting测定PAMP、ADM、ADT在大鼠肺组织中的分布及其相对含量变化。 4．RT-PCR法检测大鼠肺组织中PAMP、ADM、ADT、proADM45-92、p38MAPK、ERK1 mRNA相对表达量。 结果 1．本研究采用套管连接血管技术成功建立了大鼠颈部左向右分流肺动脉高压模型。 (1) HE染色可见实验组大鼠肺动脉壁增厚，包括平滑肌层及内膜层。对照组大鼠肺动脉管壁厚度正常，内膜光滑、连续。 (2)实验组大鼠肺动脉收缩压与对照组比较明显升高，实验组大鼠肺动脉相对中膜厚度及右室／(左室+室间隔)比例明显增加。 2．免疫组化法测定ADM、ADT、PAMP三种活性肽段在两组大鼠肺内的分布及其蛋白表达可见： (1) ADM、ADT在肺高压组及对照组大鼠肺组织内的分布较一致，棕色颗粒比较显著的分布于血管平滑肌层，血管内皮细胞内则黄染不明显。 (2)正常对照组大鼠中，PAMP主要分布在肺血管平滑肌细胞中，蛋白表达量较低，实验组大鼠中黄染区域明显增加，存在于血管外膜、血管平滑肌细胞之中。 (3)免疫组化累积光密度显示，实验组大鼠肺内ADM、PAMP蛋白表达量增加而ADT含量则降低。 3．RT-PCR法测定结果可见实验组大鼠肺组织ADM、proADM45-92 mRNA表达增强，ADT mRNA表达减弱，PAMP mRNA无统计学变化，p38MAPK、ERK1 mRNA水平升高。 4．Western blotting测定ADM、PAMP在肺组织中实验组蛋白相对含量高于对照组，ADT含量降低。 结论 1．本研究采用套管连接血管技术成功的建立了大鼠左向右分流肺高压模型，模型的建立与小儿先天性心脏病左向右分流肺动脉高压形成过程相似，更有利于探究先天性心脏病肺高压的形成机制。 2．ADM可能起到延缓左向右分流肺动脉高压进展的作用；本研究首次明确了ADT在肺高压大鼠肺内的分布情况。 3．分布于正常对照组血管平滑肌细胞中的PAMP可能在肺动脉高压形成的过程中被分泌至血管外膜及血管平滑肌中，以阻止肺动脉高压的进程。 4．ADM前体各活性肽段之间在分泌方面的互相抑制及其在生物活性方面的相互影响是proADM各活性肽段分子内调控的一种表现，proADM分子内调控学说在肺动脉高压的发生机制中起到了重要的作用。 5．ADM可能通过第二信使cAMP对MAPK信号途径起到抑制作用，以延缓肺动脉高压的进程。
【图文】：
ADT在Wistar大鼠肺内的分布
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R725.4
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