儿童结核病结核分枝杆菌PE_PGRS33基因变异特点研究

发布时间：2020-03-29 13:03

【摘要】：目的: 1、初步了解重庆地区儿童结核病结核分枝杆菌临床分离株的数目可变串联重复序列(Variable number tandem repeats, VNTR)的分布特征,并寻找适合该地区的VNTR位点组合。 2、了解儿童结核病体内结核分枝杆菌PE_PGRS33基因变异与临床表现之间的关系。 3、了解儿童结核病患儿体内是否存在混合感染,以及结核分枝杆菌PE_PGRS33基因亚群的存在特点。方法: 1、采用多位点串联重复序列(Multiple locus VNTR analysis, MLVA)分型方法,选择标准的24个VNTR位点,对101例结核分枝杆菌临床分离株DNA进行检测,结果采用BioNumerics 6.1数据库软件进行聚类分析和单位点Hunter-Gaston分辨率指数(Hunter-Gaston index, HGI)分析,并比较分析国际推荐的分组(12位点、15位点、24位点)的基因分型鉴定能力。 2、101例结核分枝杆菌临床分离株的PE_PGRS33基因通过序列比对,分析其基因变异与临床表型之间的关系。 3、选择5例临床诊断为粟粒性肺结核合并结核性脑膜炎的初治患儿,将其培养出的结核分枝杆菌生长良好及间隙明显的菌落进行单一菌落的分离克隆培养,共获得116株结核分枝杆菌克隆株,对其进行MLVA分型并对PE_PGRS33基因进行序列分析。结果: 1、MLVA分析结果显示24个VNTR位点在不同菌株中存在明显的多态性,101例结核分枝杆菌临床分离株可分为1个基因群83种基因型,其中69种基因型只有1个菌株,占68.32%(69/101),另有32株临床分离株表现出14种基因型,占31.68%(32/101),成簇率为17.82%; 24个VNTR位点的HGI具有较大差异(0.168~0.829),HGI能达到0.5以上的VNTR位点数有16个;24个VNTR位点进行不同的位点组合:12个、15个和24个位点组合的HGI分别为0.995、0.996、0.996。 2、101例结核分枝杆菌临床分离株存在12种PE_PGRS33基因型,其中59.41%的临床分离株具有PE_PGRS33基因变异,能导致PE_PGRS33蛋白氨基酸序列的改变,这种存在基因变异的结核分枝杆菌经过统计学分析,发现与临床表现为结核性脑膜炎与PPD阴性相关。 3、116株结核分枝杆菌克隆株通过MLVA基因分型,表现出5种基因型。来自同一患儿的克隆株其基因型相同,同一患儿不同部位的克隆株其基因型亦相同;116株结核分枝杆菌克隆株PE_PGRS33基因通过序列分析比对,共表现出2种类型的序列变异。1种为插入突变联合点突变,另外1种为缺失突变联合点突变。来自同一患儿的克隆株其PE_PGRS33基因变异类型相同,同一患儿不同部位的克隆株其PE_PGRS33基因变异类型亦相同。结论: 1、重庆地区儿童结核病中结核分枝杆菌存在基因多态性,国际推荐的15个VNTR位点组合的MLVA分型方法适用于本地区儿童结核病中结核分枝杆菌流行病学的研究。 2、PE_PGRS33基因与临床表型之间存在联系,其基因变异易在临床上表现为结核性脑膜炎与PPD阴性。 3、从单个结核病患儿分离出的多克隆结核分枝杆菌其基因型具有同质性,而其PE_PGRS33基因亦相同,说明初治结核病患儿感染具有单一性,并不存在混合感染。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R725.1

【参考文献】