IFN-γ干预轮状病毒肠道外感染的乳鼠与NF-κB表达相关性的研究

发布时间：2020-03-31 14:47

【摘要】：目的：1.建立轮状病毒肠道外感染的BALB/C乳鼠模型，，检测肠道外感染RVBALB/C乳鼠肝脏的NF-κB水平,以及IFN-γ干预后的肝脏NF-κB水平。探讨NF-κB表达与IFN-γ的相关性。2.观察BALB/C乳鼠感染RV后的肝脏病理变化，以及IFN-γ干预后的肝脏病理变化。3.肝脏病理变化联合NF-κB水平变化来探讨不同剂量IFN-γ在干预RV感染过程中的作用。4.通过监测Th1/Th2失衡中IFN-γ起到的作用，探讨IFN-γ是否能为临床治疗轮状病毒肠炎提供一种新的方法。 方法：猴轮状病毒SA-11株，分装，-80℃保存备用。实验动物选用1-2日龄的清洁级BALB/C乳鼠，将40只BALB/C乳鼠随机分成5组，每组8只，其中空白组为腹腔注射0.1ml无菌生理盐水组，并记为第一天，于第二天使用无菌生理盐水0.1ml在BALB/C乳鼠背部进行皮下注射三天。肠道外感染对照组为腹腔注射0.1mlSA-11株病毒并记为第一天，于第二天使用无菌生理盐水0.1ml在BALB/C乳鼠背部进行皮下注射三天。IFN-γ干预组为腹腔注射0.1ml SA-11株病毒并记为第一天，于第二天使用大中小剂量(2ug，0.2ug，0.02ug)IFN-γ在BALB/C乳鼠背部进行皮下注射三天。感染病毒后，各组进行隔离饲养。接种病毒后观察BALB/C乳鼠的活动情况、饮食情况、毛色、体型、大便变化情况。于第五天处死BALB/C乳鼠，留取肝脏，免疫组化法检测NF-κB水平及RV抗原并苏木精-伊红（HE）染色光镜下观察肝脏的形态学改变。 结果：1.肠道外感染组BALB/C乳鼠表现为食欲不振，体重不增，活动减少，体毛蓬松，嗜睡等。干预组中的中等剂量组的BALB/C乳鼠活动情况，食欲情况较好，体重略有增加，大剂量干预组和小剂量组BALB/C乳鼠体重不增，活动减少。2.BALB/C乳鼠的病理改变：空白对照组肉眼下小鼠肝脏色泽鲜红，富有光泽。光镜下肝脏组织未见病理改变。肝细胞呈多面体形，胞核大而圆，常染色质丰富，有1至数个核仁。肠道外感染组肉眼下小鼠肝脏色黯红、肿大，光镜下可见肝脏细胞胞质疏松，线粒体肿胀，大量脂肪变空泡变性。肝细胞周围大量淋巴细胞中性粒细胞浸润，细胞点状坏死可见核分裂象。IFN-γ小剂量干预组肝脏肉眼肿大较肠道外感染组无明显变化，光镜病理改变较病毒感染组稍有减轻。IFN-γ中等剂量干预组肝脏肉眼肿大较病毒感染组明显减轻，光镜下可见肝脏线粒体肿胀，脂肪变空泡变性明显减轻。部分炎症细胞浸润，可见少量点状坏死和少量核分裂象。IFN-γ大剂量干预组肝脏肉眼肿大较病毒感染组加重，光镜下可见肝脏线粒体肿胀，脂肪变空泡变性明显严重。大量炎症细胞浸润，可见多量点状坏死和核分裂象。3.肠道外感染组可见多数活化的NF-κB表达于细胞核中，呈棕黄色颗粒。大中小剂量干预组细胞核中的染色范围及强度较病毒感染组均增加。4.RV感染后的各组肝细胞胞质中可见棕黄色染色颗粒。 结论：1.肠道外RV感染引起BALB/C乳鼠肝脏病理改变，表现为脂肪变性，炎症细胞浸润，细胞点状坏死。三种不同剂量IFN-γ干预后，中等剂量组肝脏病理损伤较肠道外感染组有所减轻，大剂量组肝脏病理损伤较肠道外感染组有所加重，小剂量组肝脏病理损伤较肠道外感染组无明显变化。2.肝脏NF-κB的检测显示三种不同剂量干预组的NF-κB表达均较肠道外感染组增加，但是三组中大剂量干预组的表达增加更为明显。3.肝脏NF-κB表达显示，IFN-γ能刺激NF-κB的表达。NF-κB表达在适当范围内增加会对抵抗RV起到积极作用，但是超过一定的限度则会损伤肝脏。4.Th1-Th2混合反应中Th1分泌的促炎因子IFN-γ，在合适的剂量对机体抵抗RV感染起良好作用，过高的剂量则会损伤机体。
【图文】：

1 BALB/C 乳鼠感染后的表现白对照组活动力强，体重逐日增加，且无一例死亡。肠道外感染组于感染后时开始有 BALB/C 乳鼠出现腹泻，腹部膨胀，精神倦怠，肛门红肿，大便量和均较正常对照组要多，体重增长较空白对照组缓慢甚至倒退。干扰素干预组染后 48 小时开始有 BALB/C 乳鼠出现腹泻，其中大剂量干预组和小剂量干预LB/C 乳鼠体重不增，腹部膨胀，精神倦怠，肛门红肿。中等剂量干预组体重增加，且腹泻情况在第三天时较肠道外感染组有所减轻。2 BALB/C 乳鼠肠道外感染 RV 后肝脏 RV 抗原免疫组织化学检测在肝细胞胞质中复制，免疫组织化学检测胞质内和细胞膜上可见大量棕黄色分布，可以证明RV肠道外感染动物模型建立成功。

肠道外感染组RV杭原免疫组织化学化学染色(HEX400)
【学位授予单位】：蚌埠医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R725.1

【参考文献】

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2 姚英民;欧巧群;陈瑶;;轮状病毒感染全身扩散诱发因素的初探[J];南方医科大学学报;2006年10期

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本文编号：2609219